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PAXgene Blood RNA MDx Kit

从稳定在PAXgene Blood RNA Tubes里的血液中全自动、高通量纯化胞内RNA
  • 收集时立即稳定RNA
  • 优化纯化高品质RNA
  • 全自动RNA纯化过程

PAXgene Blood RNA MDx Kit用于在BioRobot MDx全自动核酸分离纯化系统或BioRobot Universal System上完全自动化、高通量纯化胞内RNA。(PAXgene 96 Blood RNA Kit还提供同样的手工方式的96孔技术)使用PAXgene Blood RNA Tubes(BD提供,货号762165)进行样本采集和稳定,此系统提供从采集、稳定到纯化高品质RNA的完整分析前解决方案。

Cat No./ID: 762431
PAXgene Blood RNA MDx Kit (4)
For 4 x 96 RNA preps on the BioRobot MDx workstation: 4 PAXgene 96 RNA Plates, 4 PAXgene 96 Filter Plates, Buffers (wash buffers are labeled with bar codes), Proteinase K, RNase-Free DNase Set, Plasticware, Collection Vessels. To be used with PAXgene Blood RNA Tubes
Cat No./ID: 9016753
Shaker-Adapter, 24-tube, PAXgene
Adapter for PAXgene Blood RNA Tubes on the shaker unit of the BioRobot Universal System
Cat No./ID: 9238279
PAXgene 96 Incubator Block
Block for denaturation of eluates in PAXgene 96 procedures

仅限于科研应用,不适用于诊断,不为疾病的诊断、预防或治疗提供参考信息。


0
未检测到RT-PCR抑制剂。
在BioRobot MDx工作站上使用PAXgene Blood RNA MDx Kit处理48个水样本。收集洗脱液并进行4重real-time RT-PCR,百分比如图所示。每个试剂重复四次实验,使用来自HeLa细胞的相等量的RNA以及β-actin的引物和探针。[A] CT值(平均值±标准偏差)以及平均CT值和0%反应(ΔCT)的差异。无反应被抑制(ΔCT ≥0.5)。[B] 20个反应的扩增曲线如图所示,RT-PCR无可检测到的抑制。
1
自动PAXgene RNA纯化流程。
收集血液样本(2.5 ml)到PAXgene Blood RNA Tubes,随后离心。加入蛋白酶K和一个经优化的孵育缓冲液消化蛋白。将管子转移到BioRobot MDx或BioRobot Universal System,自动进行RNA纯化。
2
高品质RNA。
血液样本来自3位供体,收集到PAXgene Blood RNA Tubes中,一式两份。使用PAXgene Blood RNA MDx Kit在BioRobot MDx工作站上纯化RNA。使用Agilent 2100 Bioanalyzer分析RNA。每个扫描图谱显示了RNA的完整指数(RIN),表明纯化获得高品质的纯RNA。[A]分析供体A的2个样本。[B] 分析供体B的2个样本。[C] 分析供体C的2个样本。
3
基因组DNA水平低。
从收集在PAXgene Blood RNA Tubes中的384个血液样本中纯化RNA,在BioRobot MDx上使用PAXgene Blood RNA MDx Kit处理。使用基因组DNA特异性的real-time TaqMan PCR技术以及β-actin的引物和探针定量基因组DNA。DNA的量以总核酸含量百分比的形式给出。
4
在不同仪器上使用具有可重复性。
血液样本来自6位供体,收集到PAXgene Blood RNA Tubes中,一式五份。使用PAXgene Blood RNA MDx Kit在3个不同的BioRobot MDx工作站(MDx 1、MDx 2和MDx 3)上纯化RNA,同时使用PAXgene 96 Blood RNA Kit(PAX 96)手动纯化RNA。纯化的RNA使用定量real-time RT-PCR以及c-fos转录子的引物和探针分析。所有值都在该分析的±3x总精密度内(2.34 CT),如水平线所示。
Performance

PAXgene Blood RNA自动化操作流程提供高品质RNA,对同一供体具有高度可重复性(参见"High-quality RNA from different donors")。由于产量与供体高度相关,个体产量可能不同。整合的DNase处理确保减少基因组DNA污染,一般少于0.1%(参见"Very low levels of genomic DNA")。完全自动化的PAXgene Blood RNA操作流程获得的RNA产量与手工的PAXgene 96 Blood RNA操作流程相当(通常≥80%)。当大于95%的样本被处理时,从2.5 ml健康的人类全血(每毫升4.6 x 106 – 1.1 x 107个白细胞)中纯化的RNA产量一般≥3 µg。纯化的RNA可即用于下游应用,如定量real-time RT-PCR,检测不到RT-PCR抑制(参见"No RT-PCR inhibition detected)。系统误差很小,在一般的real-time RT-PCR实验误差范围内(参见"High intersystem reproducibility")。

灵敏、标准化的操作流程可将样本间交叉污染的风险降到最低。从收集在PAXgene Blood RNA Tubes中的48个血液样本和48个水样本中纯化总RNA。样本以棋盘样式在96孔板中排布。使用PAXgene Blood RNA MDx Kit在BioRobot MDx全自动核酸分离纯化系统上纯化后,使用18s rRNA特异性引物和探针进行40个PCR循环,对所有样本都进行定量real-time PCR。血液样本的循环阈值(CT)在27.3到32.7间,而水样本经40个循环后检测不到RNA。

Principle

血液样本(2.5 ml)直接收集到PAXgene Blood RNA Tubes中,使用PAXgene Blood RNA MDx Kit进行RNA纯化。PAXgene Blood RNA Tubes含有专利配方的试剂,可快速稳定RNA。血液样本在PAXgene Blood RNA Tubes中可室温保存长达5天。PAXgene Blood RNA MDx Kit中提供的硅胶模技术可自动纯化RNA。获得的RNA可准确代表体内表达谱,适用于一系列下游应用。

Procedure
简单的纯化流程开始于在PAXgene Blood RNA Tube中离心沉淀核酸。加入蛋白酶K和优化的孵育缓冲液消化蛋白。指管在转移到BioRobot MDx全自动核酸分离纯化系统或BioRobot Universal System。装好缓冲液和塑料器皿后,在QIAsoft Operating System的指导下,BioRobot工作台可完成完全自动化的RNA纯化流程(参见"Automated PAXgene RNA purification procedure")。纯化后,最后热处理洗脱液可提高在下游应用中的性能。总操作时间为3–4小时,最多25–30分钟手工操作时间。可选一次运行批处理48或96个样本的实验方案。
Applications

纯化的RNA可即用于一系列下游应用,包括:

高通量、定量real-time RT-PCR
Expression-array和expression-chip分析
cDNA合成
RNase和S1核酸酶保护
Northern印迹、点印迹和狭缝印迹分析
引物延伸
Features
Specifications
应用 PCR, real-time PCR, qPCR, NASBA, cDNA synthesis
洗脱体积 120 µl
自动化处理 BioRobot MDx workstation, BioRobot Universal System
规格 96-well plate
主要样本类型 Whole blood
处理 Automated
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 Cellular RNA
仅限科研使用/CE认证/ASR RUO
样本量 2.5 ml
每次处理样本量;通量 48 or 96 samples
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 3–4 hours
产量 >3 µg

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产品介绍与指南 (2)
常见问题 (16)
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应用说明 (1)
Typical total RNA yields from PAXgene Blood RNA Tubes processed with BioRobot instruments and the PAXgene Blood RNA MDx Kit
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