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exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit

从血清或血浆样本中高效纯化囊泡RNA
  • 可处理大体积样本,可灵敏检测低丰度转录本
  • 1小时内即可完成囊泡RNA的分离
  • 采用离心柱纯化流程,能够平行处理多个样本
  • 可从血清或血浆中分离miRNA和mRNA
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit采用亲和性膜离心柱,可从exosomes和来自血清或血浆中的其他细胞外微泡中高效分离RNA。Maxi规格的分离柱可处理多达4 ml的大体积样本,因此能够可靠检测低丰度RNA。该试剂盒能够快速、便利的获得结果,十分适用于敏感的下游应用。
Cat No./ID: 76204
Buffer XBP (250 ml)
250 ml Binding Buffer
Cat No./ID: 76214
Buffer XE (45 ml)
45 ml Elution Buffer
Cat No./ID: 77023
exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20)
For purification of total exosome-derived RNA from serum/plasma; includes 20 exoEasy columns (10 Maxi, 10 Midi) and 20 RNeasy MinElute spin columns
Cat No./ID: 77044
exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit (50)
For purification of total exosome-derived RNA from up to 1 ml serum/plasma; includes 50 exoEasy Midi columns and 50 RNeasy MinElute spin columns
Cat No./ID: 77064
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50)
For purification of total exosome-derived RNA from up to 4 ml serum/plasma; includes 50 exoEasy Maxi columns and 50 RNeasy MinElute spin columns

exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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exoEasy膜上结合的囊泡完整,且比超速离心法具有更高纯度。
使用扫描电镜(SEM;20000倍放大倍率)观察并对比:预过滤血浆(0.8 µm)超速离心得到的可溶性沉淀,以及从exoEasy纯化柱洗脱的未裂解洗脱液。两种制备方法的产物都含有囊泡状结构,这些结构的预期大小为50–200 nm(白色箭头,比例尺为200 nm)。超速离心法的产物还含有很多较小的不可识别结构,与细胞外囊泡的预期形状和大小不同。
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exoRNeasy分离得到血浆中细胞外囊泡的小RNA和大RNA。
使用Bioanalyzer对这两种方法分离的囊泡RNA大小进行分析。对血浆进行预过滤(0.8 µm),去除较大的微粒,之后通过目前常用的超速离心法,或exoRNeasy方法分离囊泡。两种方法之后纯化获得的RNA大小和产量相似。
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exRNeasy分离获得血浆中的所有mRNA和囊泡miRNA。
采用exRNeasy技术从预过滤的血浆中分离RNA,exoEasy纯化柱的流出液可直接裂解。图示为RT-qPCR实验获得的原始CT值,分离实验重复两次,qPCR实验也重复了两次。

* Arroyo, J.D. et al. (2011) Argonaute2 complexes carry a population of circulating microRNAs independent of vesicles in human plasma. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108, 5003.
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exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit工作流程——从样本到囊泡到总RNA,只需1小时。
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit从预过滤的血浆中分离囊泡只需20分钟。之后进行总RNA分离,仅需35分钟。从样本到囊泡RNA,仅需1小时!您能够更快获得RNA,将宝贵的时间花在结果解读上。
Performance
exoRNeasy纯化exosomes和其他细胞外微泡与超速离心法相比,不仅速度更快,并且产物纯度更高。扫描电镜显示,虽然这两种纯化技术都能够纯化预期大小的完整的囊泡,但超速离心法的产物还含有很多不符合预期的更小、或其他形状的细胞结构(参见Intact vesicles are eluted from the exoEasy membrane with higher purity compared with ultracentrifugation)。
 
此外,Bioanalyzer分析显示,exoRNeasy和传统超速离心方法分离得到的大RNA和小RNA长度和产量相似(参见exoRNeasy isolates small and large RNAs from extracellular vesicles in plasma)。

通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液进行分析,结果显示,exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA,包括细胞外囊泡的miRNA,且不含细胞(参见exoRNeasy captures all mRNA and vesicle-specific miRNAs in plasma)。
Principle
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit改进了传统的超速离心微泡分离方法,能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡。该试剂盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术,通过离心柱和特制缓冲液,从多达4 ml的预过滤血浆中分离exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技术分离总RNA。整个实验流程,从血清/血浆样本到RNA产物,只需1小时。
Procedure
从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步:纯化exosomes和分离RNA(参见The exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit workflow — sample to microvesicles to total RNA in just 1 hour)。

在exosomes纯化步骤,预过滤的血浆(不包含大于0.8 μM的微粒)与Buffer XBP混合,加至exoEasay亲和性膜离心柱上,结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡,之后使用QIAzol裂解。

在RNA分离步骤,在QIAzol洗脱液中加入氯仿,回收水相,将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上,洗涤三次后洗脱。
Applications
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit高度适用于从血浆或血清样本中的囊泡重分离包括mRNA和miRNA的总RNA。

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试剂盒操作手册 (1)

For purification of total RNA, including miRNA, from exosomes and other extracellular vesicles (EVs) in animal and human plasma and serum


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参考文献
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