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RNeasy Plus Micro and Mini Kits

从细胞/组织样本中纯化不含苯酚的总RNA,配有基因组DNA去除柱
  • 独特的gDNA Eliminator柱,无需DNase处理
  • 数分钟内得到高品质RNA,提取流程方便快捷
  • 产物RNA不含苯酚 
  • RNA在敏感的下游应用中表现出色,如real-time RT-PCR和RNA-Seq
RNeasy Plus Kits将快速方便的RNA纯化步骤和有效去除基因组DNA污染整合在一起。使用该试剂盒能够从多种培养细胞和易裂解组织中纯化获得高纯度、高产量RNA。RNeasy Plus Mini Kit 一次能够纯化获得100 µg总RNA(〉200 nt),并且高效去除基因组DNA。RNeasy Plus Micro Kit则适用于样本量较少的情况,可分离获得45 µg总RNA。该试剂盒可在QIAcube全自动核酸纯化仪上实现自动操作,可用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的稳定组织样本。
Cat No./ID: 74034
RNeasy Plus Micro Kit (50)
For 50 micropreps: RNeasy MinElute Spin Columns, gDNA Eliminator Spin Columns, Collection Tubes, Carrier RNA, RNase-Free Water and Buffers
Cat No./ID: 74134
RNeasy Plus Mini Kit (50)
For 50 minipreps: RNeasy Mini Spin Columns, gDNA Eliminator Spin Columns, Collection Tubes, RNase-Free Water and Buffers
Cat No./ID: 74136
RNeasy Plus Mini Kit (250)
For 250 minipreps: RNeasy Mini Spin Columns, gDNA Eliminator Spin Columns, Collection Tubes, RNase-Free Water and Buffers
RNeasy Plus Micro and Mini Kits适用于分子生物学应用。该系列产品不可用于疾病的诊断、预防或治疗。
0
RNA产量具有高度可重复性。
使用RNeasy Plus Mini Kit或Supplier AV的类似试剂盒,从不同量的Jurkat细胞中纯化总RNA,重复两次。对β-actin进行real-time RT-PCR分析(40个循环)。使用RNeasy Kit可获得较低的CT值,说明其具有较高的RNA产量。使用Supplier AV的试剂盒,则未从102个细胞纯化的RNA中检测到转录本。
1
高效去除组织的基因组DNA。
使用RNeasy Plus Mini Kit或其他供应商的试剂盒,从各种小鼠组织(每个样本10 mg)中纯化总RNA,重复两次。对c-jun进行real-time PCR分析,测定纯化RNA中DNA污染物的量。
2
RNeasy Plus实验流程。
利用较短的工作流程,只需不到30分钟即可完成RNA纯化并去除基因组DNA。
3
高效去除细胞的基因组DNA。
使用 [A] RNeasy Plus Mini Kit或者 [B] Supplier AV的整合基因组DNA去除步骤的RNA纯化试剂盒,从Jurkat细胞样本(每个样本1 x 106个细胞)中纯化总RNA。使用(+RT)或不使用(-RT)逆转录酶对β-actin进行两次重复的real-time RT-PCR分析。-RT曲线证明,使用RNeasy Plus Mini Kit纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。
4
可直接用于芯片分析的RNA。
使用RNeasy Plus Mini Kit从1 x 106个HeLa细胞中纯化总RNA,重复两次。使用GeneChip IVT Labeling Kit从两个重复的RNA样本(各3.5 μg)中制备cRNA。在GeneChip Human Genome U133A probe芯片上分析cRNA样本(各15 μg)。散点图显示了两个样本间的相关性(Pearson相关系数 [r] 为0.996)。红色:两个样本中均存在的基因;蓝色:在一个样本中不存在或者处于临界状态的基因;黄色:在两个样本中均不存在或者处于临界状态的基因。
Performance
使用RNeasy Plus技术从细胞和组织中提取RNA,产物不含基因组DNA,产量高、可重复性好,适用于敏感的下游应用(参见Effective cell genomic DNA removal, Effective tissue genomic DNA removal, High, reproducible RNA yieldsArray-ready RNA)。从组织和培养细胞中提取的RNA完整性Agilent RIN数值接近10。

该试剂盒纯化产物不含短于200个核苷酸的RNA(如rRNA和tRNA),因此有富集mRNA的效果。如需从培养细胞中分离获得含有小RNA(如miRNA)的总RNA,我们提供专门的分离方案作为补充,请参见产品使用手册。
Principle
细胞和易裂解组织首先在含有异硫氰酸胍的高变性Buffer RLT Plus中裂解和匀质化,能使RNases立即失活,以保证分离到完整的RNA。裂解液再流过gDNA Eliminator柱。该离心柱与高盐缓冲液共同作用,可选择性高效的去除基因组DNA。加入乙醇以提供RNA结合的合适条件,样本再加入到RNeasy离心柱。含有硅胶膜的特制离心柱能特异性的结合裂解细胞中的RNA。

对于多脂和难裂解组织,推荐使用RNeasy Plus Universal Kits。对于高通量的总RNA纯化,推荐使用RNeasy Plus 96 Kit。如需从其他类型样本中分离含有miRNA的总RNA,推荐使用miRNeasy Kits。
Procedure

RNeasy Plus Micro Kit能从多达5 x 105个细胞或5 mg组织中分离总RNA,RNeasy Plus Mini Kit能够从107个细胞或30 mg组织中分离总RNA。简洁的工作流程可在25分钟内纯化得到已去除基因组DNA的RNA。样本首先被裂解和匀质化。裂解液流过gDNA Eliminator柱,在流过gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇,样本再上样到RNeasy离心柱。RNA结合到膜上,污染物被洗去。获得高品质RNA,RNeasy Plus Micro Kit的洗脱体积为14 µl,RNeasy Plus Mini Kit的洗脱体积为30 µl。

处理不同的起始样本可用不同的实验方案。实验方案的不同之处主要在于样本的裂解和匀质化。样本上样到gDNA Eliminator柱之后的步骤就类似。

使用Buffer RLT Plus(RNeasy Plus Micro Kit提供)进行组织破碎和匀质化时,可能会产生过多泡沫。在破碎和匀浆前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX(单独提供)可充分减少泡沫产生。Reagent DX经仔细检测,表明配合此试剂盒使用不会影响RNA的纯度或下游应用。

Applications

RNeasy Plus Kit纯化得到的RNA适合对少量DNA污染敏感的下游应用,如定量real-time RT-PCR和RNA-Seq。纯化得到的RNA还可用于其他应用。

RNeasy Plus Micro Kit适用于小样本,包括:

激光显微切割冰冻切片
细针穿刺
Features
Specifications
应用 RT-PCR, realtime RT-PCR, microarray
洗脱体积 14 µl
规格 Spin column
整合基因组DNA去除步骤 Yes
主要样本类型 Tissue, cells
处理 Manual (centrifugation)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 Total RNA
样本量 5 x 10e5 cells or 5 mg tissue
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 25 min
产量 Varies

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常见问题 (24)
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补充实验方案 (2)

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There are two protocols: follow Protocol 1 if you want to purify total RNA containing miRNA, or follow Protocol 2 if you want to purify small RNA (includes miRNA, 5S rRNA, and tRNA) and larger RNA (>200 nt) separately.
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试剂盒操作手册 (2)
For purification of total RNA using gDNA Eliminator columns from small samples, including
  • animal and human cells (≤5 x 10^5)
  • animal and human tissues (≤5 mg)
  • microdissected cryosections
and for RNA cleanup and concentration
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For purification of total RNA from animal cells and easy-to-lyse animal tissues using gDNA Eliminator columns
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参考文献
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