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RNeasy MinElute Cleanup Kit

RNA回收和浓缩,小体积洗脱
  • 有效回收酶反应RNA
  • 可浓缩少量RNA至10 μl
  • 可回收不同方法纯化的RNA
  • 15分钟即可获得高品质RNA

RNeasy MinElute Cleanup Kit使用基于硅胶膜技术的特制RNeasy MinElute离心柱,可回收并浓缩来自于酶反应体系或其他样本中的RNA。该试剂盒还可用于RNA样本脱盐。可以将至多45 μg的RNA纯化至10 μl的体积中。整个纯化流程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动完成。

Cat No./ID: 74204
RNeasy MinElute Cleanup Kit (50)
50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), RNase-free Reagents and Buffers

RNeasy MinElute Cleanup Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
高品质RNA。
对使用磺酸-苯酚方法从HeLa细胞中纯化获得的总RNA,使用RNeasy MinElute Cleanup Kit进行回收和浓缩。Agilent 2100 Bioanalyzer分析显示了RNA具有高品质。
1
RNA的浓度。
使用RNeasy MinElute Cleanup Kit浓缩图示量的HeLa细胞总RNA,每次反应使用12 µl洗脱液中的5 µl。在ABI Sequence Detection System上使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit及β-actin特异性引物和探针进行real-time RT-PCR。
2
RNA的可靠回收。
使用RNeasy MinElute Cleanup Kit浓缩图示量的HeLa细胞总RNA。在LightCycler System上使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit及p16基因特异性引物和探针进行real-time RT-PCR。
3
高效去除real-time RT-PCR抑制剂。
不进行回收,抑制剂会导致real-time定量时RNA量被低估。采用酸酚法从HeLa细胞中分离总RNA,并使用或不使用RNeasy MinElute Cleanup Kit进行回收。使用图示体积的RNA洗脱液,按图“RNA浓缩”中所述进行real-time RT-PCR。利用获得的CT值计算RNA量。
Performance
RNeasy MinElute Cleanup Kit可纯化高品质总RNA,无杂质或酶抑制物,其A 260 /A280比值为1.9–2.1(参见"High-quality RNA") 。相当于少于一个细胞的RNA的量(少至1 pg)也可以被浓缩(参见"Concentration of RNA")。可以纯化大量的RNA(至多45 µg),适用于敏感的分析(参见"Reliable cleanup of RNA")。在下游应用中可采用小量反应体积,确保提高反应效率。该试剂盒可获得高纯度的RNA,可使更多的样本用于反应中,且无抑制作用(参见"Efficient removal of real-time RT-PCR inhibitors")。
Principle

RNeasy MinElute Cleanup Kit专为从酶反应(如标记、体外转录)中纯化和浓缩RNA而设计,通过乙醇沉淀和有机提取方法分离RNA,并使RNA样本脱盐,浓缩硅胶膜操作流程制备的RNA(如,PAXgene Blood RNA制备)。RNeasy技术结合异硫氰酸胍裂解和硅胶膜纯化,简化了总RNA纯化技术。

Procedure

异硫氰酸胍裂解缓冲液和乙醇加至样本中,创造促进RNA选择性结合到RNeasy MinElute膜上的条件。然后将样本上样到RNeasy MinElute离心柱。RNA结合到硅胶膜上,污染物被高效洗去,用水洗脱得到高品质RNA。

同步回收和浓缩酶反应产物或粗RNA制备样本,可在15分钟内完成。相较而言,尤其是从小样本中,耗时的乙醇沉淀浓缩和回收会导致RNA损失。RNeasy MinElute操作流程比真空离心更快,仅离心而无需脱盐和去除其他杂质样本。RNeasy MinElute离心柱独特的设计确保将纯化得到的RNA浓缩至10 µl,用于生物芯片分析和real-time RT-PCR等下游应用。整个纯化流程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。

Applications

RNeasy MinElute技术纯化得到高品质RNA,适用于各种下游应用,包括:

Northern印迹、点印迹和狭缝印迹
终点法RT-PCR
定量real-time RT-PCR
芯片分析
Poly A+ RNA筛选
Features
Specifications
应用 PCR, qPCR, real-time PCR, microarray
洗脱体积 10–14 µl
规格 MinElute Spin column
主要样本类型 (Crude) RNA preps
处理 Manual
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 RNA
样本量 200 µl
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 <15 minutes
产量 45 µg

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试剂盒操作手册 (1)
For RNA cleanup and concentration with small elution volumes
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There are two protocols: follow Protocol 1 if you want to purify total RNA containing miRNA, or follow Protocol 2 if you want to purify small RNA (includes miRNA, 5S rRNA, and tRNA) and larger RNA (>200 nt) separately.
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参考文献
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