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QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit

从人类血浆或血清中浓缩和纯化游离DNA和RNA

  • 浓缩的核酸,高上样量,低洗脱体积
  • 高效回收DNA和RNA碎片
  • 无需有机提取或乙醇沉淀
  • 完全去除污染物和抑制剂

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit大大简化了从血浆或血清中浓缩和纯化游离DNA和RNA的过程。

Cat No./ID: 1017647
Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG
Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG
Cat No./ID: 55114
QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit (50)
For 50 preps: QIAamp Mini Columns, Tube Extenders (20 ml), QIAGEN Proteinase K, Carrier RNA, Buffers, VacConnectors, and Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml)

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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回收游离DNA。
在24个血浆样本中加入同等量的DNA片段(200 bp和1000 bp)。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从5 ml血浆中纯化DNA,洗脱体积为80 μl。使用QuantiTect Multiplex PCR Kit对每个DNA片段特异性的66 bp靶点进行双重real-time PCR,定量DNA的产量。
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回收片段化DNA,表现更出色。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从5 ml血浆中纯化游离DNA,或者使用QIAamp MinElute Virus Vacuum Kit从200 μl血浆中纯化游离DNA,洗脱体积为100 μl。使用QuantTect Multiplex PCR Kit对18S rRNA基因内的66 bp扩增片段和500 bp扩增片段进行双重real-time PCR,定量DNA的产量。500 bp扩增片段和66 bp扩增片段的扩增差异显示DNA被片段化,从而导致完整的500 bp目标序列的丰度低于较短的66 bp靶点。(请注意差异大于五倍样本输入体积差异)。
2
高效纯化游离miRNA。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从4 ml采集血浆中纯化游离DNA,洗脱体积为50 μl。将标准试剂盒实验方案与适用于miRNA的专用实验方案进行比较。使用TaqMan microRNA Assay(Applied Biosystems)定量miRNA 30b的产量,使用Human miScript Assay(QIAGEN)定量miRNA 16的产量。采用miRNA实验方案获得的CT值较低,表示miRNA的产量更高。
3
高效回收甲基化DNA。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从4 ml血浆中纯化加入的甲基化DNA和非目标poly-A RNA,洗脱体积为45 μl。使用EpiTect Bisulfite Kit(QIAGEN)进行亚硫酸氢盐转化,使用real-time MSP分析和QuantiTect Multiplex PCR Kit组分在ABI PRISM 7900HT Sequence Detection System上进行甲基化特异性PCR(MSP)。对两个全甲基化位点数据进行分析。
Performance

分析血液中肿瘤特异性的胞外DNA片段和mRNA可对普通血液样品进行特异性地肿瘤类型检测。这些存在于血清或血浆中的游离核酸通常都是<1000 bp(DNA)或<1000 nt(RNA)的片段。此外,小至21 nt的miRNAs可作为某些癌症和疾病状态的生物标记。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可从人类血浆、血清和其他无细胞体液中高效纯化游离核酸。纯化效率高、重现性好、产量高(参见"Reproducible recovery of circulating DNA")。应用延长的上样管和真空装置QIAvac 24 Plus可将样品处理量提至5 ml,洗脱体积可在20–150 μl之间灵活变化,可浓缩低浓度核酸。 该试剂盒采用先进的技术,硅胶膜选择性的结合目标核酸,提高片段化核酸的回收率(参见"Improved recovery of fragmented DNA")。

使用RNase-Free DNase Set进行DNA柱上消化,纯化获得不含DNA的游离RNA 。特别设计的流程确保高效纯化诸如miRNA等小RNA(参见"Efficient purification of circulating miRNA")。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit高效纯化甲基化DNA,经纯化的DNA维持其甲基化状态,可进行亚硫酸氢盐转化实验,进行甲基化状态分析(参见"Efficient recovery of methylated DNA")。

经纯化和浓缩的游离DNA和RNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可即用于各种下游应用,包括:

PCR 和定量real-time PCR以及RT-PCR
用于基于血液样品的癌症生物标记的研究、验证和检测
病毒核酸检测 
Principle

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit简化了从血浆或血清中纯化游离DNA和RNA的过程。无需苯酚-氯仿抽提。核酸特异性结合到QIAamp Mini离心柱上,污染物流走。PCR抑制物,如:二价阳离子和蛋白,可通过三步有效的洗涤步骤被完全去除,结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液洗脱。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid技术从人类血浆、血清或尿液中获得游离的DNA和RNA。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit有可选择性结合的硅胶膜和20–150 μl灵活的洗脱体积。使用RNase-Free DNase Set进行DNA柱上消化,可纯化游离RNA。

Procedure

QIAamp Circulating Nucleic Acid的流程包括4步(裂解、结合、洗涤和洗脱),使用QIAamp Mini离心柱在真空装置上处理。简单的操作适用于同时处理多个样品,可在2小时内处理24个样品。QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit有待使用者验证是否能适用于所有的病毒种类的RNA和DNA纯化。

Applications

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可从含低浓度DNA和RNA碎片的原始样本(人血浆中常规游离DNA的浓度为1–100 ng/ml)中纯化和浓缩游离的DNA、RNA、miRNA,包括病毒核酸。起始样本体积至多5 ml。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可从以下样本类型中纯化和浓缩核酸:

人类血浆
血清
尿液
Features
Specifications
应用 PCR, real-time PCR
符合CE/FDA/IVD -
洗脱体积 20–150 µl
规格 QIAamp Mini Columns
主要样本类型 Serum, plasma
处理 Manual (vacuum)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 Free-circulating DNA, RNA and miRNA, viral DNA, viral RNA
样本量 1-5 ml
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 <2 hour for 24 preps
产量 Varies, due to donor-to-donor variations and disease status

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试剂盒操作手册 (1)
For concentration and purification of free-circulating DNA and RNA from human plasma or serum
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参考文献
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