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TurboCapture 384 mRNA Kit

从细胞中快速简单地纯化mRNA,适合于高通量应用

  • 384孔板规格纯化mRNA
  • 简短的操作步骤和最少的手动操作时间
  • mRNA纯化和cDNA合成在同一孔中进行
  • 标准板可兼容自动工作站

TurboCapture 384 mRNA Kit采用独特的寡聚核苷酸固定技术快速简单地纯化mRNA。细胞裂解液添加到TurboCapture板(384孔板)中,mRNA即与每个孔里固定的oligo-dT杂交。污染物被洗涤去除,分离得到的mRNA即可直接用于cDNA合成,也可洗脱后进行下游应用。在96孔板中进行低通量纯化,可使用TurboCapture 96 mRNA Kit。

Cat No./ID: 72271
TurboCapture 384 mRNA Kit (5)
5 x TurboCapture 384 mRNA Plates, and RNase-Free Buffers

TurboCapture 384 mRNA Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
平行分析siRNA。
用靶向不同p21基因的siRNA转染DLD-1结肠癌细胞。72小时后,用TurboCapture 384 mRNA Kit纯化miRNA。通过real-time RT-PCR检测p21相对于GAPDH的表达水平。图中的柱形表示三个样本的平均和标准偏差。
1
从悬浮细胞中纯化mRNA。
使用TurboCapture 96 mRNA Kit从悬浮细胞(U937、K562和Jurkat细胞)中纯化mRNA。然后洗脱获得纯化的mRNA并进行定量检测。
2
孔间可重复性高。
使用TurboCapture 384 mRNA Kit从K562细胞中纯化mRNA。将纯化后的mRNA固定在TurboCapture孔板的每个孔中,进行cDNA合成。使用TurboCapture孔板的8个孔中的cDNA,对凋亡相关基因(Fas,p21或p53)和GAPDH内参进行real-time PCR分析。CT值高,孔间重复性好,CVs <3%。所有实验步骤均在自动化仪器上完成。
3
TurboCapture mRNA实验步骤。
4
PCR分析。
使用TurboCapture 96 mRNA Kit从HEK 293细胞中纯化mRNA。将纯化后的mRNA固定在TurboCapture孔板的每个孔中,进行cDNA合成。如图所示,固定后的cDNA进行3次PCR反应。每次PCR之后用10 mM pH 7.5的Tris·Cl洗涤,共洗涤3次。孔2和3是重复的相同样本。孔1是阴性对照,其cDNA合成没有mRNA。(对p53、p21和β-actin的PCR获得的条带相似,数据未显示。)
5
基因表达分析。
使用TurboCapture 96 mRNA Kit从不同数量的K562细胞中纯化mRNA。将mRNA固定在TurboCapture孔板的孔中,对JunB进行RT-PCR分析。
6
在同一孔中进行mRNA纯化和cDNA合成。
[A]将含有poly A+ mRNA的裂解液加入到含有固定的oligo-dT的孔中。[B] Poly A+ mRNA杂交到固定的oligo-dT上。[C] 在mRNA杂交时,cDNA用固定的oligo-dT作模板,进行合成。合成的cDNA共价结合到孔壁上。(或者,可使用可溶性引物合成可溶性cDNA,图中未显示。)
Performance
TurboCapture mRNA Kits可快速简单地从培养细胞,包括粘附和悬浮细胞中,纯化mRNA(参见"mRNA purification from suspension cells")。由于采用标准孔板规格和简单的工作流程,TurboCapture mRNA Kits可实现自动化,mRNA纯化、cDNA合成和PCR可在同一孔内进行。这避免了样本转移,确保孔间结果的高重复性(参见"High well-to-well reproducibility")。当孔中固定的oligo-dT作为引物时,合成的cDNA可共同结合到孔上,并能重复几次使用(参见"Sequential PCR analysis")。此试剂盒非常适合于高通量基因表达分析应用,如通过real-time RT-PCR进行siRNAs筛选(参见"Parallel analysis of siRNAs")。TurboCapture mRNA Kits在基因表达分析中具有高灵敏度,适用于少至单个细胞的靶标检测(参见"Gene expression analysis")。
Principle

TurboCapture mRNA Kits采用独特的寡聚核苷酸固定技术,可从粘附和悬浮细胞以及总RNA中快速、经济地纯化mRNA,需要最少的手动操作时间。此试剂盒通过mRNA与96或384孔板每个孔中固定的oligo-dT杂交,从而纯化mRNA。孔中固定的oligo-dT可作为引物合成cDNA,mRNA和产生的cDNA可共同结合到孔上。TurboCapture板能与大部分热循环兼容,这使mRNA杂交、后续的cDNA合成和PCR可在同一块孔板中进行,最大程度减少样本处理时间和成本。由于采用标准孔板形式和简单的工作流程,操作流程可在智能型工作站上实现自动化。

Procedure
使用TurboCapture mRNA Kits可从总RNA中纯化mRNA,也可从各种类型细胞中纯化mRNA,包括粘附和悬浮细胞。(如果从悬浮细胞中纯化mRNA,需购买Buffer TCL、2x[货号1031586]。)简单地将样本裂解液加入到TurboCapture板(96或384孔板)中。mRNA即与每个孔里固定的oligo-dT杂交,可洗去污染物。分离得到的mRNA即可直接用于cDNA合成,也可洗脱后进行下游应用(参见"TurboCapture mRNA procedure")。孔中固定的oligo-dT可作为引物,cDNA可共同结合到孔上,并能重复使用。或者,可溶的oligo-dT引物或随机六聚物可用于制备可溶的cDNA(参见"mRNA purification and cDNA synthesis in the same well")。
Applications

TurboCapture mRNA Kits非常适用于高通量基因表达分析应用,如:

Real-time RT-PCR
定量real-time RT-PCR
通过real-time RT-PCR筛选siRNAs
Features
Specifications
应用 PCR, cDNA synthesis
洗脱体积 20 µl
规格 384-well plate
主要样本类型 Cultured cells
处理 Manual (centrifugation)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 mRNA
样本量 20 µl
稳定 Yes
技术 Oligonucleotide immobilization technology
每次运行或制备时间 30 minutes – 1.5 hours
产量 Varies
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