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Oligotex Direct mRNA Midi/Maxi Kit

从细胞和组织中纯化mRNA

  • 只需30分钟即可获得高产量纯mRNA
  • 无需使用oligo-dT纤维素或乙醇沉淀
  • 灵活性强,适合不同起始量的RNA样品
Oligotex Direct mRNA Kits可从细胞和组织中纯化mRNA。每个Oligotex Kit包括用于结合poly A+ mRNA的Oligotex树脂和用于洗涤、洗脱结合的mRNA的离心柱。可选用Oligotex mRNA Kits从总RNA中纯化mRNA和回收poly A+体外转录子。
Cat No./ID: 72041
Oligotex Direct mRNA Midi/Maxi Kit (6/2)
For 6 mRNA midi or 2 maxipreps: 1 ml Oligotex Suspension, Large Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml), RNase-Free Reagents and Buffers

Oligotex Direct mRNA Midi/Maxi Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
Oligotex mRNA实验流程。
1
beta-actin mRNA的RT-PCR。
使用oligo-dT引物进行逆转录,使用actin特异性引物进行PCR。[A]使用Oligotex mRNA Mini Kit,从0.25、0.5、或1 µg小鼠肝脏总RNA(泳道13)中分离Poly A+ mRNA。C:阴性对照。[B] 使用Oligotex Direct mRNA Micro Kit,从103或104个HeLa细胞中分离mRNA(泳道12)。M:123 bp ladder。
2
Oligotex颗粒和oligo-dT纤维素。
在相同的放大率下,电镜扫描Oligotex颗粒和oligo-dT纤维素。记录同一大小和形状的Oligotex颗粒。
Performance

Oligotex Direct mRNA kits可从100到1 x 108个细胞(表1)或10 mg到1000 mg组织(表2)中纯化mRNA。

从组织或细胞中纯化的Poly A+ mRNA适用于RT-PCR等下游应用(参见"RT-PCR of beta-actin mRNA")。

表1. Oligotex Direct mRNA Kit的规格(从细胞中纯化mRNA)
每次制备的起始材料(细胞数量) 每个Oligotex Direct mRNA Mini Kit最多制备次数  每个Oligotex Direct mRNA Midi/Maxi Kit最多制备次数
100* –2 x 105 12 (14) 6 (14)
2 x 105–5 x 105 12 (14) 6 (14)
5 x 105–1 x 106 12 (14) 6 (14)
1 x 106–5 x 106 12 6 (14)
5 x 106–1 x 107 6 6 (14)
1 x 107–2 x 107 3 6 (9)
2 x 107–3 x 107 6
3 x 107–5 x 107 6
5 x 107–7 x 107 4
7 x 107–1 x 108 2
* 最低检测量。
购买额外的离心柱后,每个试剂盒的最多制备次数。可能需要额外的1.5 ml微离心管。
表2. Oligotex Direct mRNA Kit 的规格(从组织中纯化)
每次制备的起始材料(组织) 每个Oligotex Direct mRNA Mini Kit的最多制备次数 每个Oligotex Direct mRNA Midi/Maxi Kit的最多制备次数
≤10 mg 12 (14)* 6 (14)*
10–25 mg 12 (14)* 6 (14)*
25–50 mg 6 6 (14)*
50–100 mg 3 6 (9)*
100–150 mg 6
150–250 mg 6
250–500 mg 4
500–750 mg 2
750–1000 mg 2
* 购买额外的离心柱后,每个试剂盒的最多制备次数。可能需要额外的1.5 ml微离心管。
Principle

Oligotex Direct mRNA Kits只需1小时(使用快速实验方案只需30分钟)就可直接从细胞或组织中纯化 poly A+ mRNA。 Oligotex Direct mRNA纯化流程采用强变性裂解条件,快速形成RNase-free环境,以分离完整mRNA。Oligotex Direct mRNA Kits包含基于异硫氰酸胍的缓冲液,用于高效的细胞和组织裂解、蛋白变性和RNase失活,以保证分离完整的mRNA。Oligotex颗粒的优化设计、保护RNA的裂解液与杂交环境,实现了短时间内对poly A+ mRNA的回收率高于90%。使用Oligotex技术纯化poly A+ mRNA无需进一步纯化,可即用于各种标准应用。

Oligotex树脂由大小均一(直径1.1 µm)的聚苯乙烯-橡胶颗粒组成,为完美的球状(参见"Oligotex particles and oligo-dT cellulose"),含有与表面共价结合的dC10T30寡核苷酸。Oligotex颗粒的大小、成分和表面结构经优化,均匀分散并需要最少的离心时间。颗粒形成稳定的悬浮液,为快速和高效结合多聚腺苷酸提供较大的表面积。高效率、高精确度的杂交确保通过快速、高效的杂交获得高纯度的poly A+ mRNA。Oligotex纯化过程将poly A+ RNA流失降至最低,避免RNase降解风险,手动操作时间最少化。这些都使得该产品是同步处理多个样品的理想选择。

Procedure

经优化的Oligotex纯化流程方便简单(参见"Oligotex mRNA procedure"),将细胞或组织裂解液匀浆与Oligotex树脂共同孵育,简单离心收集Oligotex:mRNA复合物。试剂盒中提供的离心柱提供最方便的操作,同时为某些应用提供可选的批量操作流程。洗涤之后,用小体积量的Tris缓冲夜或水洗脱mRNA。无需乙醇沉淀。

Applications

使用Oligotex树脂纯化的Poly A+ mRNA适用于多种下游应用,包括:

  • RT-PCR
  • cDNA合成
  • cDNA库的构建
  • 消减杂交
  • 体外翻译
Features
Specifications
应用 PCR, real-time PCR, microarray, transfection..
洗脱体积 50–500 µl
规格 Spin column
主要样本类型 Tissue, cells
处理 Manual (centrifugation)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 Poly A+ mRNA
样本量 1.0 g/1 x 10e8
稳定 Yes
技术 Polystyrene-latex particles
每次运行或制备时间 30–50 minutes
产量 >90% recovery

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试剂盒操作手册 (1)
For Purification of poly A+ RNA from total RNA, purification of poly A+ RNA directly, from cultured cells or tissues, and purification of polyadenylated in vitro transcripts 
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用户开发的实验方案 (2)
The procedure has been used successfully by customers for regeneration of Oligotex resin from spin columns following elution of poly A+ mRNA.
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The procedure has been successfully used for isolation of mRNA from adipose tissue by customers. Because of the nature of adipose tissue it cannot be used immediately in Oligotex Direct mRNA Protocols; simple centrifugation, however, eliminates the problem, and the procedure works fine.
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