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miRNeasy Serum/Plasma Kit

用于从动物及人体血浆和血清中纯化包括miRNA的无细胞总RNA

  • 内参用于标准化
  • 洗脱体积最小化
  • 高纯度RNA,适合多种下游应用
  • 简单、灵敏的操作流程
  • 自动化实验方案
miRNeasy Serum/Plasma Kit包括检测miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control的miScript Primer Assay,提供一个方便的系统用于标准化。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control(需单独订购)是C. elegans miR-39 miRNA的类似物,以每管10 pmol冻干粉形式提供。
Cat No./ID: 217184
miRNeasy Serum/Plasma Kit (50)
For 50 total RNA preps: 50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), QIAzol Lysis Reagent, Ce_miR-39_1 miScript Primer Assay, RNase-free Reagents and Buffers
Cat No./ID: 219610
miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control
10 pmol lyophilized C. elegans miR-39 miRNA mimic

miRNeasy Serum/Plasma Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Performance

miRNeasy Serum/Plasma Kit可从至多200 µl血清或血浆中有效纯化RNA。miRNeasy Kits制备的RNA纯度高,可直接用于敏感的下游应用。miRNeasy操作流程将盐或苯酚污染的可能性降到最低,这些污染可能影响后续分析。

Principle

目前miRNA研究中最令人兴奋的领域之一就是对血清或血浆样本中存在的miRNA进行检测。在血清和血浆中存在的相对稳定的胞外miRNA引起了极大兴趣,因为miRNA水平变化可作为潜在的多种疾病的无创性生物标志物。通过从血清或血浆纯化RNA,发现某些癌症出现几种miRNAs的独特表达。miRNeasy Serum/Plasma Kit可从小体积血浆或血清中纯化RNA。血清和血浆中的RNA通常由小于100个核苷酸的分子组成。纯化的RNA可使用miScript PCR System进行生物标志物研究。

miRNeasy Serum/Plasma Kit整合了基于苯酚/胍的样本裂解方法和基于硅胶膜的总RNA纯化方法。试剂盒中包括的QIAzol Lysis Reagent是苯酚和异硫氰酸胍的单相溶液,便于裂解组织,抑制RNases,并去除大部分有机抽提裂解液中的胞内DNA和蛋白。

标准化内参的使用

在血清或血浆样本中miRNA表达谱使用什么作为内参,目前在研究学者间还没有明确共识。很多研究者选择将合成的miRNA导入RNA样品中,以帮助监测RNA回收率和反转效率。QIAGEN推荐miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control作为血清或血浆miRNA表达谱的内参。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control是C. elegans miR-39 miRNA类似物,使用miScript PCR System配合Ce_miR-39_1 miScript Primer Assay(miRNeasy Serum/Plasma Kit中提供)通过RT-PCR可轻松检测。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control需单独订购。试剂盒中提供的Ce_miR-39_1 miScript Primer Assay需与miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control配合使用。获取更多细节,可参考miRNeasy Serum/Plasma Handbook

Procedure

血清和血浆样本溶于QIAzol Lysis Reagent中。加入氯仿后,裂解液离心后分成水相和有机相。RNA位于上层水相,DNA位于中间相,蛋白位于下层有机相或中间相。

提取上层水相后,加入乙醇以提供RNA结合的合适条件,RNA分子大于18个核苷酸。样品再加入RNeasy MinElute离心柱,总RNA结合到膜上,苯酚和其他污染物被有效洗去。高品质RNA在小体积不含RNase水中洗脱。

血清和血浆中主要含有小RNAs,因此无需分开纯化小RNA和大RNA组分。

使用miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control进行标准化

使用miRNeasy Serum/Plasma Kit纯化miRNA时,加入QIAzol Lysis Reagent后,在加入氯仿分相前,向样本中加入miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control。real-time RT-PCR后,合成miRNA的CT值可对样本进行标准化,可作为不同RNA纯化产量和扩增效率的对照。此外,通过与合成miRNA的标准曲线CT值比较,可评估RNA的回收,因为合成miRNA与RNA纯化流程无关。

在QIAcube全自动核酸纯化仪上进行miRNA自动纯化

在QIAcube全自动核酸纯化仪上可完全自动纯化包括miRNA的总RNA。新型QIAcube全自动核酸纯化仪采用先进技术处理QIAGEN离心柱,将自动化、低通量样品制备无缝整合到实验室工作流程中。使用QIAcube全自动核酸纯化仪的样品制备流程与手工操作相同(如裂解、结合、洗涤和洗脱),可使用miRNeasy Serum/Plasma Kit进一步纯化高品质RNA。

Applications

miRNeasy Serum/Plasma Kit可纯化包括miRNA的总RNA,用于多种应用,包括:

生物标志物研究
Northern印迹分析
使用miScript PCR System进行定量real-time RT-PCR
微阵列分析

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