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PAXgene Tissue miRNA Kit

从固定和稳定于PAXgene Tissue Containers的组织中纯化miRNA和总RNA

  • 固定、稳定、纯化的整体系统
  • 高效纯化miRNA和总RNA
  • 从组织中抽提高品质的miRNA
  • 保持组织形态

PAXgene Tissue miRNA Kit用于从固定和稳定于PAXgene Tissue Containers的组织中纯化总RNA,包括大于18 nt的RNA,纯化基于离心柱形式的硅胶膜RNA纯化技术。固定和储存于PAXgene Tissue Containers的组织样本可以是石蜡包埋的,用于病原体研究和后续的RNA、miRNA和/或DNA纯化。配合容器,该试剂盒为分子分析提供从采样、固定和稳定到高品质miRNA和总RNA纯化的完整解决方案。

Cat No./ID: 766134
PAXgene Tissue miRNA Kit (50)
For 50 RNA preps: PAXgene RNA MinElute Spin Columns, PAXgene Shredder Spin Columns, Processing Tubes, Microcentrifuge Tubes, Carrier RNA, RNase-Free DNase, and RNase-Free Buffers; to be used in conjunction with PAXgene Tissue Containers

仅限于科研应用,不适用于诊断,不为疾病的诊断、预防或治疗提供参考信息。


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从储存在PAXgene Tissue Containers中的固定组织中高效纯化miRNA。
来自不同器官的组织用PAXgene Tissue Fix固定3小时,转移到PAXgene Tissue Stabilizer中在室温下储存24小时。处理完成后,使用PAXgene Tissue RNA Kit从石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA(RNA/miRNA)。使用PAXgene Tissue miRNA Kit,将miRNA富集的部分(200 nt)从同一组织块的切片中分离出来(Enriched miRNA)。将纯化所得的RNA作为模板,使用miScript Reverse Transcription Kit和miScript SYBR® Green PCR Kit对miRNA miR-10a进行定量real-time RT-PCR分析。
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PAXgene Tissue miRNA实验流程。
Performance

采集器和试剂盒配合使用,构成分子分析中组织采集、固定和稳定,高品质RNA纯化,包括miRNA的分析完整解决方案(参见"Efficient purification of miRNA from fixed tissue stored in PAXgene Tissue Containers")。

使用PAXgene Tissue miRNA Kit纯化的总RNA纯度非常高。将基因组DNA污染降至最低,纯化所得RNA可直接用于下游分析,无可检测到PCR抑制物。该试剂盒可分离出所有大于18nt的RNA分子。
Principle

当前传统组织学中的组织固定方法对于分子分析来说应用是有限的。含有福尔马林的固定剂与生物分子交联,修饰核酸和蛋白质。在组织固定、储存和处理过程中,交联导致核酸降解。因为无法完全去除交联,其引起的化学修饰将限制敏感的下游应用,如定量PCR或RT-PCR。为了实现对同一样本进行分子病理检测和传统病理检测,需要一种方法在固定分子的同时保存组织形态。

PreAnalytiX研制了PAXgene Tissue System以满足这些需求。该系统包括组织采集装置(PAXgene Tissue Container用于采集、稳定、储存及运输人类样本组织)以及用于纯化总RNA、DNA或miRNA的试剂盒。PAXgene Tissue Containers可进行组织固定,用于组织病理学研究;也可从同一样本中纯化高纯度核酸,用于分子分析。固定和稳定方法保持了组织形态学,福尔马林固定组织中同时存在没有破坏性交联和降解的完整核酸。

为了纯化总RNA,包括miRNA,该系统需要应用PAXgene Tissue Containers采集和稳定组织,然后应用PAXgene Tissue miRNA Kit分离和纯化RNA。
Procedure

PAXgene Tissue Containers是预装有2种试剂的双腔容器。PAXgene Tissue Fix快速浸润并固定组织。固定之后,将其从PAXgene Tissue Fix中移出,转移到同一容器中含有PAXgene Tissue Stabilizer稳定液的另外一个腔内。组织被储存在PAXgene Tissue Stabilizer稳定液中,其核酸和组织形态可在室温下稳定3–7天,在2–8℃下可稳定2–4周,不同组织的保存时间不同。储存于-15–-30℃时,组织形态和核酸完整性可能稳定至少26个月。

固定了的样本可包埋于石蜡中,用于组织学研究。从PAXgene Tissue固定的组织样本中纯化核酸可在石蜡包埋之前或之后进行。

PAXgene Tissue miRNA Kit提供3种不同操作方案,用于从PAXgene Tissue Containers固定和稳定的组织中提取总RNA,包括小于200nt的RNA分子,例如5.8S rRNA、5S rRNA、tRNAs和miRNAs。经优化的结合和洗涤条件确保纯化小至18nt的RNA分子。作为先决条件,组织必须固定并稳定于PAXgene Tissue Containers中。

在结合缓冲液、Buffer TM1中破碎并匀质化组织样品。离心之后去除细胞碎片,在裂解液中添加乙醇确保可结合所有18nt以上的RNA。然后将样品放至PAXgene RNA MinElute离心柱上,总RNA结合到膜上,污染物被有效洗脱。在两次洗涤步骤之间,用DNase I处理膜,去除少量结合的DNA。洗涤之后,用低盐洗脱液洗脱包含miRNA的RNA,并加热使RNA变性(参见"The PAXgene Tissue miRNA procedure")。

在PAXgene Tissue Fix和PAXgene Tissue Stabilizer中固定和贮存组织样品的条件是使用动物组织确定的。

Applications

纯化所得miRNA和总RNA可即用于各种下游应用:

Northern印迹分析
RT-PCR和定量real-time RT-PCR
微阵列分析
Features
Specifications
应用 PCR, qPCR, real-time PCR
洗脱体积 45–70 µl
规格 96-well plate
主要样本类型 Tissue samples
处理 Manual (centrifugation or vacuum)
样本量 25–100 mg
技术 Silica technology
Time per run Varies
产量 Varies

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产品介绍与指南 (4)
Two worlds in one sample
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For isolation and purification of total RNA, including miRNA, from tissue samples fixed and stabilized using the PAXgene Tissue System

 


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Moving toward excellence and standardization in tissue collection and fixation

 


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试剂盒操作手册 (1)
For isolation and purification of total RNA, including miRNA, from tissue samples stabilized in PAXgene Tissue Containers
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参考文献
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