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PAXgene Blood RNA Tubes

分离和纯化稳定在PAXgene Blood RNA Tubes中血液的细胞内RNA
  • 符合欧盟体外诊断98/79/EC指令
  • 用于采样、稳定及纯化的整合系统
  • RNA在18–25°C条件下可稳定多达3天
  • 在–20°C或–70°C条件下至少稳定60个月
  • 分析前标准化的样本处理过程
PAXgene Blood RNA体系包括用于血液采集、稳定和运输的PAXgene Blood RNA Tubes(由BD提供,货号762165),以及基于硅胶膜技术、离心柱法分离纯化的PAXgene Blood RNA Kit。纯化可使用离心机进行手工操作,也可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动运行。该产品表现卓越,确保高度可靠的RNA纯化。
Cat No./ID: 762125
PAXgene Blood RNA Tubes (100)
100 PAXgene Blood RNA Tubes; available only via www.PreAnalytiX.com (cat. no. 762165)

PAXgene Blood RNA Tubes适用于体外诊断。


Performance

 

PAXgene Blood RNA Tubes适用于采集全血并稳定细胞内RNA,在18–25°C条件下可稳定长达3天(参见"RNA stability at 18–25°C: FOS"和"RNA stability at 18–25°C: IL1B"),或在2–8°C条件下稳定长达5天(参见"RNA stability at 2–8°C: FOS"和"RNA stability at 2–8°C: IL1B")。当前的数据显示,细胞内RNA在–20°C或–70°C条件下可保存至少60个月。

使用PAXgene Blood RNA System纯化的总RNA纯度高,A260/A280值在1.8和2.2之间,且基因组DNA含量不超过1.0% (w/w)。当使用30%的洗脱液时,至少95%的样品在RT-PCR中没有出现反应抑制的情况。样本制备的平均时间约为90分钟(根据12个样本的制备时间),手工操作只需40分钟。对于95%以上的样本,2.5 ml健康人类全血的RNA产量不低于3 µg。由于产量高度依赖于供体,单次产量可能会有变动。对于单个供体,PAXgene Blood RNA System确保产量可重复性高(参见"Reproducible and repeatable RNA purification"和"Repeatability and reproducibility of RNA yield")以及RT-PCR的可重复性高(参见"Reproducibility between users"、"Reproducibility between kit lots"和下方表格)。

对于超过95%的样本,从2.5 ml健康人类全血中获得的RNA产量不少于3 μg。图片"RNA yield and purity — automated processing"显示的是3名实验员使用3批试剂盒自动化处理288个样本的RNA产量。由于使用的是混合血液样本而非单个的PAXgene Blood RNA Tubes,实验结果不能反映单一个体血液样本的RNA预期产量。由于产量高度依赖于供体,单个产量会有差别。

当使用30%的洗脱液时,至少95%的样品不会出现RT-PCR抑制。通过对RNA阴性样品(水)中beta-球蛋白和FOS转录子序列与RNA阳性样本(人类全血)进行定量RT-PCR分析,未发现使用自动化流程处理样品中有交叉污染。

使用PAXgene Blood RNA System的自动流程制备的RNA纯度高,没有RT-PCR抑制(见上文),A260/A280值在1.8 和2.2之间。经real-time PCR分析beta-肌动蛋白的序列发现,超过95%的样品的基因组DNA含量不高于1% (w/w) 。图片"RNA yield and purity — automated processing"显示了3个实验员使用3批试剂盒处理288个样品的A260/A280值和相对基因组DNA含量。

如图"Reproducibility between automated and manual protocols"所示,使用PAXgene Blood RNA System自动纯化RNA的流程提供高度可重复的RT-PCR结果。

RT-PCR数据总结
检测系统 FOS/18S rRNA assay IL1B/18S rRNA assay
数据对比 平均值 ± SD 平均值 ± SD
(ΔΔCT) (ΔΔCT) (ΔΔCT) (ΔΔCT)
同一使用者使用不同批试剂盒的可重复性
所有使用者,第一批–第一批 0.00 0.00 0.00 0.00
所有使用者,第一批–第二批 –0.03 0.48 –0.07 0.66
所有使用者,第一批–第三批 –0.21 0.52 0.11 0.71
不同使用者使用同一批试剂盒的可重复性
所有批次,使用者A–使用者A 0.00 0.00 0.00 0.00
所有批次,使用者A–使用者B –0.46 0.44 –0.06 0.69
所有批次,使用者A–使用者C –0.31 0.60 –0.15 0.71
使用者:进行研究的实验员。
批次:本次研究中使用的试剂盒的批次。
SD:标准差。
计算平均值ΔΔCT (N = 120) 和标准差的数据来源于图"Reproducibility between users"和"Reproducibility between kit lots"。
Principle

PAXgene Blood RNA Kit用于从在PAXgene Blood RNA Tube中采集的2.5 ml人类全血中纯化总RNA,操作简单,可手工操作,也可自动化运行(参见"Manual PAXgene Blood RNA procedure"和"Automated PAXgene Blood RNA procedure")。

PAXgene Blood RNA Tubes 含有专利申请中的特定试剂,基于RNA固定的专利技术(US Patents 6,602,718 和6,617,170)。这些试剂成分可保护RNA分子,避免其被RNA酶降解,并将基因表达体内变化的改变降至最小。PAXgene Blood RNA Tubes适用于采集全血并稳定细胞内RNA,在18–25°C条件下可稳定长达3天(参见"RNA stability at 18–25°C: FOS"和"RNA stability at 18–25°C: IL1B")或在2–8°C条件下稳定长达5天(参见"RNA stability at 2–8°C: FOS"和"RNA stability at 2–8°C: IL1B")。当前的数据显示,细胞内RNA在–20°C或–70°C条件下可保存至少60个月。

Procedure

PAXgene Blood RNA纯化操作流程简单,可手动或自动进行(参见"Manual PAXgene Blood RNA procedure"和"Automated PAXgene Blood RNA procedure")。

PAXgene Blood RNA纯化手动流程

将重悬的沉淀和蛋白酶K一起溶解在经优化的缓冲液中孵育,进行蛋白质酵解。然后应用PAXgene Shredder离心柱再次离心,匀浆细胞裂解液,并去除剩余的细胞残骸。将流过部分的上清液转移到干净的微型离心管中,加入乙醇调节结合条件,将裂解液装入一个PAXgene RNA离心柱中。快速离心后,RNA会选择性地结合到PAXgene硅胶膜上,杂质则流过。剩余的杂质通过几次高效洗涤去除。在第一次和第二次洗涤步骤之间,使用DNA酶处理膜,以去除微量残余的DNA。洗涤之后,使用洗脱缓冲液洗脱RNA并进行热变性。

PAXgene Blood RNA纯化自动流程

使用QIAcube全自动核酸纯化仪制备样品的流程与手动法相同,您可继续使用PAXgene Blood RNA Kit纯化高品质RNA。

自动化的RNA纯化流程由两个部分组成,"PAXgene Blood RNA Part A"和"PAXgene Blood RNA Part B",在两个部分之间需要短暂的手工操作。

将经离心、洗涤、重悬的核酸沉淀从PAXgene Blood RNA Tube转移到离心管中,将离心放到QIAcube全自动核酸纯化仪工作台的恒温震荡器中。实验员选择并启动菜单中的"PAXgene Blood RNA Part A"。QIAcube全自动核酸纯化仪会自动运行,直到将RNA洗脱至洗脱缓冲液中。实验员将含有已纯化RNA的离心管转移到QIAcube全自动核酸纯化仪的恒温震荡器中,选择并启动菜单中的"PAXgene Blood RNA Part B",QIAcube全自动核酸纯化仪会执行热变性。

样本平均制备时间是125分钟(基于制备12个样本的时间),手工操作时间只需约20分钟。

Applications
该试剂盒与PAXgene Blood RNA Tubes共同使用,可从全血中分离纯化细胞内RNA进行RT‑PCR。
Features
Specifications
Additive/concentration Additive 6.9 ml
Closure type/color BD Hemogard/Red
Draw volume 2.5 ml
Label type Paper
Quantity 8.5 ml
Tube size 16 x 100 mm

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产品介绍与指南 (2)
For collection, transport, and storage of whole blood and stabilization and purification of intracellular RNA

 


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For molecular diagnostic testing

 


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应用说明 (3)
Comparison of miRNA recovery from the PAXgene Blood miRNA System and the Tempus Blood RNA Tube processed with the Tempus Spin RNA Isolation Kit

 


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In situ stability of RNA in blood specimens stored for 8 years (96 months) at –20°C and –70°C in PAXgene Blood RNA Tubes

 


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Typical total RNA yields from PAXgene Blood RNA Tubes processed with the PAXgene Blood RNA Kit
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试剂盒操作手册 (1)
For collection of whole blood samples for molecular diagnostic testing
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