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miRNeasy FFPE Kit

从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中进行miRNA和总RNA的纯化

  • 有效纯化miRNA和总RNA
  • 创新方法用于克服福尔马林造成的交联
  • 有效释放RNA而不会破坏其完整性
  • 85分钟流畅的操作得到RNA

miRNeasy FFPE Kit确保从福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)的组织切片中纯化含约18个核苷酸以上的总RNA。试剂盒能够回收可用的RNA片段,包括miRNA和其他小RNA,用于定量real-time RT-PCR等下游应用。

Cat No./ID: 217504
miRNeasy FFPE Kit (50)
50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes, Proteinase K, RNase-Free DNase I, DNase Booster Buffer, RNase-Free Buffers, RNase-Free Water

miRNeasy FFPE Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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从FFPE组织中高效纯化RNA。
使用miRNeasy FFPE Kit或酚-氯仿抽提从图示的大鼠组织中纯化包括miRNA在内的总RNA。使用miScript PCR System和纯化的RNA作为针对miRNA miR-16的定量real-time RT-PCR分析的模板。结果显示,对于肺和肝脏组织,使用miRNeasy FFPE Kit纯化后的CT值更低,说明其miRNA纯化产量高于使用酚-氯仿抽提的产量。对于肾脏组织,使用两种方法的CT值相当。对于所有检测组织类型,使用miRNeasy FFPE Kit纯化后的CT值均更低或相当。
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卓越的产量和实验表现。
使用miRNeasy FFPE Kit或Supplier A的同类试剂盒,从图示的大鼠组织的FFPE切片中纯化RNA。[A] 测量260 nm处的吸光值,确定RNA的产量。[B] 使用miScript PCR System和纯化的RNA作为针对miRNA miR-16的定量real-time RT-PCR分析的模板。结果显示,使用miRNeasy FFPE Kit纯化,CT值更低,说明miRNA的产量高于使用Supplier A的试剂盒纯化的产量。
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高效的real-time RT-PCR。
采用福尔马林固定大鼠肝脏组织24小时或60小时,然后使用miRNeasy FFPE Kit纯化包括miRNA在内的总RNA。使用miScript PCR System和纯化的RNA作为模板进行定量real-time RT-PCR分析,检测miRNA miR-16和miR-29a以及PGK1基因的较大mRNA。结果显示,从同一洗脱液中可同时检测到上述两种miRNA和mRNA。
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miRNeasy FFPE实验流程。
Performance
使用miRNeasy FFPE Kit纯化的总RNA和miRNA的产量和性能优于采用其他方法纯化的miRNA,如使用苯酚-氯仿抽提或者其他供应商的类似试剂盒(参见"Effective real-time RT-PCR quantification"、"Efficient RNA purification from FFPE tissues"和"Superior yields and performance")。
Principle

用福尔马林固定的组织导致RNA-RNA和RNA-蛋白质交联,从而影响了RNA在下游应用中的表现。miRNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件,可逆转福尔马林对RNA造成的交联。特别研制的的裂解缓冲液有效地将RNA从组织切片中释放出来,同时避免了RNA的进一步降解。裂解产物用DNase消化,然后优化的结合条件能够纯化含约18个以上核苷酸的所有可用的RNA。

Procedure
所有的miRNeasy FFPE操作流程都可在85分钟之内完成。优化的裂解缓冲液能够用蛋白质酶K消化样本裂解产物,仅需15分钟而且不损耗RNA产量。裂解后,在80°C下孵育样本15分钟逆转福尔马林交联。然后,在优化的DNase消化步骤中,用DNase Booster Buffer快速去除基因组DNA,并且用RNeasy MinElute离心柱纯化浓缩的RNA(参见"miRNeasy FFPE procedure")。由于RNA的洗脱体积仅有14–30 µl,在下游应用中可实现较小的反应体积。
Applications

miRNeasy FFPE Kit能够纯化包含miRNA的总RNA,并且适用于多种下游应用,如定量real-time RT-PCR。

Features
Specifications
应用 PCR, qPRC, real-time RT-PCR, microArray
洗脱体积 14-30 µl
规格 Spin column
主要样本类型 FFPE tissue samples
处理 Manual (protocol for automated processing on QIAcube available)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 miRNA, total RNA
样本量 up to 4 sections, each with a thickness up to 10 µm and a surface area up to 250mm^2 (automated protocol on QIAcube: up to 2 sections)
技术 Silica technology
产量 Varies

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产品介绍与指南 (5)
试剂盒操作手册 (1)
For purification of total RNA, including miRNA, from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections
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