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miRNeasy 96 Kit

以96孔板方式纯化组织和细胞中的microRNA和总RNA

  • 高效纯化miRNA和总RNA
  • 高效富集miRNA和< 200个核苷酸的RNA
  • 高纯度RNA适合多种下游应用
  • 实验方法可用于共纯化或分离单独组分
miRNeasy 96 Kit可从多种类型的动物组织和细胞,包括难裂解组织中纯化18个核苷酸以上的总RNA,也可单独纯化富集过的miRNA组分和总RNA(>200 nt)组分(单独纯化需要另外的RNeasy 96 plate。考虑到购买RNeasy 96 plate和洗涤液的价格,可购买RNeasy 96 Kit)。手工纯化可使用Centrifuge 4K15C或Centrifuge 4-16K,也可选择QIAvac 96真空装置。
Cat No./ID: 217061
miRNeasy 96 Kit (4)
For 4 x 96 preps: 4 RNeasy 96 plates, Collection Microtubes (racked), Elution Microtubes CL, Caps, S-Blocks, AirPore Tape Sheets, QIAzol Lysis Reagent, RNase-Free Reagents and Buffers

miRNeasy 96 Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
对多种起始材料进行高效纯化。
[A] 使用miRNeasy 96 Kit从102–107个Jurkat细胞中纯化总RNA,或 [B] 使用miRNeasy Mini Kit从20 mg至200 ng梯度稀释的大鼠肺组织匀浆物中纯化总RNA。同时从相同的样本中提取miRNA富集组分(<200 nt)。使用纯化RNA作为针对miRNA miR-16的定量real-time RT-PCR分析的模板。
1
在多种组织中进行高效共纯化。
使用miRNeasy 96 Kit从RNAlater稳定的25 mg的各种大鼠组织中纯化包括miRNA在内的总RNA。使用纯化RNA作为针对miRNA miR-16和PGK1基因的mRNA(较大)的定量real-time RT-PCR分析的模板。结果显示,从同一洗脱液中可同时检测到PGK1 mRNA(大RNA)和miR-16(小RNA)。
2
miRNeasy Kit表现优于TRIzol。
使用miRNeasy Mini Kit或TRIzol Reagent,从不同量的Jurkat细胞中纯化包括miRNA在内的总RNA。使用纯化RNA作为针对miRNA miR-16的定量real-time RT-PCR分析的模板。结果显示,使用miRNeasy Kit纯化,CT值更低,说明miRNA的产量高于使用TRIzol纯化的产量。使用miRNeasy Kit可从低至1 x 102个细胞中高效纯化miRNA。而使用TRIzol纯化1 x 102个细胞时,对其产物进行40个PCR循环,未检测出miRNA。
3
高效富集小RNA。
使用miRNeasy Mini Kit或Supplier AIV的试剂盒,从3 x 106个HeLa细胞中纯化miRNA富集组分。从miRNA富集组分中取相同量的RNA进行1.5%的凝胶电泳。同时对20mer和21mer的合成RNA进行凝胶电泳,用作对比。使用miRNeasy Kit制备的miRNA富集组分中显示了低至约18 nt的不同大小的RNA涂片。而在使用Supplier AIV的试剂盒制备的miRNA富集组分中,则主要是tRNA和5S rRNA可见。
4
无苯酚残留的高纯度RNA。
使用miRNeasy Mini Kit或TRIzol Reagent,从1 x 106个Jurkat细胞中纯化包括miRNA在内的总RNA。吸收光谱显示,使用miRNeasy Kit纯化的RNA在260 nm处获得最大OD值。而使用TRIzol纯化时的最大OD值超过260 nm,表示有酚残留。此外,使用TRIzol制备的RNA的OD230测量值更高,表示TRIzol Reagent有盐残留。
5
miRNeasy实验流程。
使用miRNeasy Mini Kit可实现包括18个核苷酸(nt)以上的RNA在内的总RNA纯化。还可以单独纯化miRNA富集组分和总RNA(>200 nt)组分。在某些敏感的下游应用中,可能需要另外富集miRNA组分以降低背景信号。
Performance

纯化含有miRNA的总RNA可直接与已保存的看家对照基因或其他靶mRNA进行miRNA表达水平的比对。miRNeasy Kit可高效富集RNA,将其浓缩至约18 nt大小。相比于使用其他试剂盒制备的样本,使用miRNeasy Mini Kit纯化后的极小片段的RNA更清晰可见(参见"Effective enrichment of small RNA")。miRNeasy Kits可从组织和细胞中纯化RNA,即使初始样本量较低也可确保高效纯化(参见"Effective purification from a range of starting amounts")。 

该试剂盒可从多种样本中纯化RNA,包括难裂解的组织(参见"Efficient copurification from a wide range of tissues")。miRNeasy操作流程可有效避免盐类或苯酚污染等影响后续分析的可能性(参见"Highly pure RNA without phenol carryover")。除了获得更高的纯度,使用miRNeasy Kits相比其他miRNA纯化方法,如TRIzol Reagent(参见"miRNeasy Kit outperforms TRIzol")。可得到更高的产量。使用miRNeasy Kits制备的RNA纯度高,可直接用于多种敏感的下游应用。

Principle

miRNeasy 96 Kit将苯酚异硫氰酸胍样本裂解技术与硅胶膜RNA技术相结合,通过真空和/或离心流程进行纯化。该试剂盒包含的QIAzol Lysis Reagent,为苯酚与异硫氰酸胍的单相溶液,用于促进组织的裂解并抑制RNases,同时除去有机溶剂萃取产物中的绝大部分细胞DNA以及蛋白质。

Procedure
miRNeasy 96 Kit可纯化含有18个核苷酸(nt)以上RNA的总RNA,也可分别纯化富集后的miRNA组分和总RNA(>200 nt)组分(参见"miRNeasy procedures")。单独纯化的富集后的miRNA组分可能需要减弱背景干扰,以便用于某些特别敏感的下游应用。在这种特定实验方案中,对每96个样本进行miRNA和小RNA(<200 nt)的富集需要2个RNeasy 96 plates。
Applications

miRNeasy 96 Kit对总RNA中miRNA的纯化适合多种下游应用,包括:

  • Northern印迹分析
  • 定量real-time RT-PCR
  • 微阵列分析
Features
Specifications
应用 PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
洗脱体积 45 µl
规格 96-well plate
主要样本类型 Tissue, cells
处理 Manual (centrifugation or vacuum)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 miRNA, total RNA
样本量 50–100 mg
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 <2 hours
产量 Varies
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