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QIAexpress Type IV Kit

高水平表达和一步纯化N端His-tagged蛋白

  • 载体含有三个阅读框
  • 表达和纯化His-tagged蛋白的完整试剂盒
  • 高水平表达N端His-tagged蛋白
  • 多功能,一步纯化和高灵敏度检测的完整系统
QIAexpress System提供用于表达、纯化、检测和分析His-tagged蛋白的产品。
Cat No./ID: 32149
QIAexpress Type IV Kit
5 μg each: pQE-30, pQE-31, pQE-32 (N-terminal 6xHis); 10 ml Ni-NTA Agarose

QIAexpress Type IV Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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pQE Vectors。
组成部分如图所示。
Performance
QIAexpress Type IV Kit可进行高表达,表达水平可达总细胞蛋白的50%。
Principle

QIAexpress pQE质粒含有强大的噬菌体T5启动子(可被E. coli RNA聚合酶识别)和两个lac操纵子遏制模块,可在E. coli中精密调控、高表达融合蛋白。在lac抑制因子存在的条件下,蛋白合成被有效阻断,细胞毒素载体的稳定性增强。pQE载体(参见pQE Vectors和表)可将His标签加在融合蛋白的N端或C端。

QIAexpress pQE Vectors的元件
元件描述
1.优化的启动子/操纵子元件 由噬菌体T5启动子和两个lac操纵子序列组成,提高lac抑制因子结合的可能性,保证对强大的T5启动子有效地抑制
2.合成核糖体结合位点RBSII  用于高效翻译
3.His标签编码序列 在克隆区域的5'或3'端
4.翻译终止密码子 含所有阅读框,可方便构建表达载体
5.两个强大的转录终止子 来自噬菌体lambda的t0和来自E. coli rrnB操纵子的T1,避免转录时通读,保证表达载体的稳定性
6.ColE1复制起点 来自pBR322
7.beta-lactamase基因(bla) 氨苄青霉素抗性
Procedure
将编码目的蛋白的片段克隆到合适的载体上,转化到合适的E. coli菌株进行表达。加入IPTG诱导表达。QIAexpress Type IV Kit载体可转化到E. coli中,作为穿梭质粒,可在昆虫细胞中表达融合蛋白或转染到哺乳动物细胞。
Applications

QIAexpress Expression System可进行高水平蛋白表达,适合多种应用,包括:

纯化功能上、构象上有活性的蛋白
变性条件下纯化抗体蛋白
结晶,用于确定三维结构
蛋白与蛋白、蛋白与DNA相互作用分析
Features
Specifications
应用 Proteomics
N或C末端标签 N-terminal tag
处理 Manual
特性 Versatile, complete system for one-step purification
起始材料 Cell lysate
标签 6xHis tag
产量 <50% of total protein

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