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TAGZyme Kit

去除蛋白的His标签,这些蛋白固有或含有可诱导DAPase终止位点

  • 高特异性N端外切酶活性,避免内部切割
  • 提供去除His标签的完整解决方案
  • 在37°C,只需30分钟即可去除95%以上的标签
  • 高纯度的最终产品
  • 消减Ni-NTA色谱层析,去除所有污染物

TAGZyme Kit包含TAGZyme Enzymes、试剂和Ni-NTA Agarose,能高特异性、高效率地去除至多10 mg His-tagged蛋白的His标签。此试剂盒可用于去除蛋白的His标签,这些蛋白自身含有DAPase终止位点(使用TAGZyme pQE-2载体表达,使用TAGZyme DAPase Enzyme处理)或含有工程设计的谷氨酰胺终止位点(使用TAGZyme pQE-1载体表达,使用TAGZyme DAPase、Qcyclase和pGAPase Enzymes处理)。选择合适的载体,请联系QIAGEN技术专家或当地经销商。

Cat No./ID: 34300
TAGZyme Kit
For processing of approximately 10 mg tagged protein: 0.5 units DAPase Enzyme, 30 units Qcyclase Enzyme, 10 units pGAPase Enzyme, 20 mM Cysteamine-HCl (1 ml), Ni-NTA Agarose (10 ml), 20 Disposable Columns

TAGZyme Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Performance
TAGZyme DAPase Enzyme可有效去除His标签N端到“终止位点”间的肽,蛋白可由TAGZyme pQE载体表达(参见"Efficient His-tag removal")。当谷氨酰胺残基作为终止位点时,可被DAPase-Qcyclase和pGAPase的共同作用去除。通过消减IMAC可从反应液中获得真正的目的蛋白。由于TAGZyme DAPase Enzyme、Qcyclase和pGAPase Enzymes自身C-端带有未切割的His标签,它们和未处理的His-tagged重组蛋白能被有效去除。
Principle

His-tagged重组蛋白是研究蛋白结构和功能的重要工具。His标签很小并具有较低的免疫原性,使它通常不需要被去除。但是,不含有载体源氨基酸的蛋白产物更适用于一些应用,例如通过X射线或NMR进行结构研究,或生产具有治疗效果的药物。

TAGZyme体系从融合蛋白上去除N端的His标签,具有很高的特异性和效率。DAPase酶用于切割纯化的His-tagged蛋白N端的肽(参见"His-tag removal")。当酶切割到“终止位点”时,消化就会停止,终止位点是一个不能作为底物的氨基酸基序(见表“DAPase 终止位点”)。如果重组蛋白自身不含有固有DAPase终止位点,可通过在载体上插入谷氨酰胺密码子来引入。在表达的蛋白中,谷氨酰胺变成焦谷氨酸,成为DAPase的终止位点。

DAPase终止位点
氨基酸 DAPase终止位点 (↓) 序列*
 赖氨酸(Lys, K)  Xaa-Xaa...Xaa-Xaa Lys-Xaa...
 精氨酸(Arg, R)  Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Arg-Xaa...
 脯氨酸(Pro, P)  Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Xaa-Pro-Xaa...
 脯氨酸(Pro, P)  Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Pro-Xaa-Xaa...
 谷氨酰胺(Gln, Q)  Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Gln-Xaa...
 异亮氨酸(Ile, I)  Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Ile-Xaa-Xaa...
*天然的DAPase终止位点(↓)是二肽内指定位点紧接的氨基酸(被切掉的二肽标有下划线)。
† 在过量Qcyclase.Enzyme存在条件下,谷氨酰胺残基变为焦谷氨酸。
Procedure

使用TAGZyme pQE-2载体表达自身含有终止位点的重组蛋白,不管DNA片段插入位点如何,都可完全、有效地去除N端His标签。使用DAPase酶孵育后,反应混合物加入到Ni-NTA基质中进行消减固定金属亲和层析色谱(IMAC)(参见"Purification of detagged proteins")。His标签片段和TAGZyme DAPase Enzyme(C-端带有未切割的His标签)与基质结合,在穿透液中可回收到纯化的、不带标签的目的蛋白。

当蛋白自身不含有DAPase终止位点时,可通过表达载体插入谷氨酰胺密码子,从而向蛋白序列中引入终止位点。TAGZyme pQE-1载体可在His标签序列和蛋白序列之间编码一个谷氨酰胺残基,可配合TAGZyme体系发挥作用。谷氨酰胺残基位于His标签后的奇数位位点,正好在原始蛋白第一个氨基酸之前。使用DAPase酶和过量的Qcyclase酶可去除His标签。通过DAPase酶去除His标签肽后,谷氨酰胺残基暴露在N端反应液中过量的Qcyclase酶能将N端的谷氨酰胺残基催化形成焦谷氨酸。N端含有焦谷氨酸的肽不能作为DAPase的底物,进一步的切割就被终止了。反应液进行一轮消减IMAC,His-tagged TAGZyme DAPase和Qcyclase Enzymes就能被去除。在穿透液中可收集到目的蛋白。目的蛋白N端的焦谷氨酸残基可被His-tagged pGAPase酶去除,pGAPase酶能被第二轮消减IMAC去除,在穿透液中即可获得纯化的、无标签的目的蛋白。

Applications

TAGZyme体系提供特异性切割、重组试剂的使用以及完全去除污染物,是获得不含His标签蛋白的理想选择,适合的应用包括:

  • 通过NMR或X射线结晶确定蛋白结构
  • 生产具有治疗功能的蛋白
Features
Specifications
应用 Production of therapeutic proteins, protein structure determination using NMR or X-ray crystallography
去除标签的效率 >95%
蛋白酶识别位点 Various signals (please see handbook)
特性 Contains optimized vectors, enzymes, and Ni-NTA resin
标签去除 Exoproteolytic
时间 30 minutes
fragment fix placeholder