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Strep-Tactin Superflow Plus

用于批量、重力流或FPLC纯化Strep-tagged蛋白
  • 结合能力提高3倍(至多9 mg蛋白/ml树脂)
  • 高度适合于从真核和原核表达系统中纯化蛋白
  • 可在任何液相层析系统上实现自动纯化
  • 几乎不影响蛋白结构、功能和免疫能力
小的Strep-tag II(WSHPQFEK)可用于通过Strep-Tactin树脂纯化有活性、天然构象的高纯度蛋白。此外,结合His标签可以进行标准的两步纯化操作流程。Strep-Tactin可结合磁珠进行小规模纯化操作流程(至多100 μg)或结合Superflow色谱层析树脂进行大规模纯化(至多9 mg/ml树脂)。Strep-Tactin树脂还提供预装柱产品,用于在液相色谱层析体系上进行自动纯化。
Cat No./ID: 30002
Strep-Tactin Superflow Plus (2 ml)
For purification of Strep-tagged proteins: 2 ml Strep-Tactin-charged Superflow Plus suspension(50%) containing 0.02% sodium azide (max. pressure: 140 psi)
Cat No./ID: 30004
Strep-Tactin Superflow Plus (10 ml)
For purification of Strep-tagged proteins: 10 ml Strep-Tactin-charged Superflow Plus suspension (50%) containing 0.02% sodium azide (max. pressure: 140 psi)
Cat No./ID: 30020
Strep-Tactin Superflow Plus Cartridge (1 ml)
1 cartridge pre-filled with 1 ml Strep-Tactin Superflow Plus (contains 0.02% sodium azide): for automated purification of Strep-tagged proteins using liquid chromatography systems
Cat No./ID: 30060
Strep-Tactin Superflow Plus Cartridge (5 ml)
1 cartridge pre-filled with 5 ml Strep-Tactin Superflow Plus (contains 0.02% sodium azide): for automated purification of Strep-tagged proteins using liquid chromatography systems

Strep-Tactin Superflow Plus适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
对任何表达体系中的Strep-tagged蛋白进行高度特异性检测。
将纯化的Strep-tagged硫氧还蛋白(10 ng)与哺乳动物(NIH-3T3)、昆虫(Sf9)和细菌(E. coli)的细胞粗提物(各10 µg总蛋白)混合。电泳和western转移后,使用Strep-tag抗体和化学发光检测法检测Strep-tagged蛋白。
1
高效纯化Strep-tagged GFP。
在60 ml E. coli培养物中表达GFP,取5 ml加入Strep-Tactin Superflow Plus。使用2.5 mM的脱硫生物素洗脱蛋白质,总蛋白产量为3.1mg。C:澄清的裂解液;E:洗脱液部分;F:流出液;M:分子量标准;W:洗涤液。
2
Strep-tagged蛋白结合到Strep-Tactin上,使用脱硫生物素洗脱。
Performance

Strep-Tactin Superflow Plus可高效纯化蛋白(参见"Efficient purification of Strep-tagged GFP with Strep-Tactin Superflow Plus"和"Highly specific detection of Strep-tagged proteins in any expression system")。  

同时,可用pQE TriSystem His·Strep TriSystem Vectors表达带有His-和Strep-tag双标签的蛋白,进行两步纯化操作流程。串联的Ni-NTA和Strep-Tactin纯化步骤标准化且十分快速,可获得超纯度蛋白。

Principle

Strep-tagged蛋白能高亲和力和特异性地结合到由链亲和素工程改造的Strep-Tactin上。漂洗过后,蛋白可由低浓度的生物素(链亲和素的天然配体)或脱硫生物素(稳定、可逆结合的生物素类似物)洗脱下来(参见" Binding of Strep-tagged proteins to Strep-Tactin and elution using desthiobiotin")。可在原核和真核体系中高效、标准地纯化带有小的Strep-tag II标签蛋白,得到高纯度蛋白。另外,当其他标签可能不适用时,可选用Strep-Tag II体系,例如EDTA等缓冲液添加剂会IMAC柱金属离子脱落。

基质 蛋白结合能力
Strep-Tactin Superflow Plus 多至9 mg/ml
Strep-Tactin Superflow 多至3 mg/ml (~150 nmol@ 20 kDa)
Strep-Tactin Magnetic Beads 200-300 μg/ml (10%悬浮液) (~10-15 nmol @ 20 kDa)
Procedure

使用pQE TriSystem Vector表达Strep-tagged蛋白,采用Strep-Tactin Superflow Plus亲和纯化操作流程从细胞裂解液中得到高纯度蛋白。可使用批量或重力流方法纯化Strep-tagged蛋白,或在FPLC兼容柱中装入Strep-Tactin Superflow Plus,可在液相色谱层析系统上纯化。Strep-Tactin Superflow Plus有1 ml和5 ml预装柱两种规格,可在液相色谱层析系统上自动纯化,如FPLC、ÄkTA和BioLogic体系,或使用注射器进行手动纯化。与Strep-Tactin树脂兼容的试剂,参见与Strep-tag Strep-Tactin相互作用兼容的试剂。

Strep-tag Strep-Tactin相互作用兼容的试剂
非离子去垢剂 离子和两性离子去垢剂 还原剂 其他
2% Triton X-100 2% N-lauryl sarcosine 50 mM DTT 25% glycerol  5 M sodium chloride
2% Tween 20 0.1% SDS     2 M ammonium chloride
2% N-octyl-β-D-glucopyranoside  
 
1.3% N-octyl-2-hydroxy-ethylsulfoxide      1 M calcium chloride 
0.2% N-nonyl-β-D-glucopyranoside 0.3% CHAPS       
2% Igepol CA-630 (Nonidet P40) 0.1% N-dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide         1 M guanidine    
0.12% C10E5; decylpentaoxyethylene 0.034% DDAO;N-decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide 1 mM phenylmethyl-sulfonyl fluoride (PMSF)    
0.03% C10 E6   10% ethanol    
0.005% C12 E8        
0.023% C12E9; dodecyl nonooxyethylene (Thesit)        
0.35% DM; decyl-β-D-maltoside        
 0.007% LM; N-dodecyl-β-D-maltoside        

标签位于C端可确保只有全长蛋白被纯化。纯化操作流程具有高度可重复性,确保每次制备都得到同样高品质蛋白。在免疫检测步骤中,可用Strep-tag抗体对Strep-tagged蛋白进行高灵敏度和特异性的检测。

Applications

Strep-Tactin Superflow Plus可用于高效、可重复地纯化至多9 mg Strep-tagged蛋白/ml树脂。纯化得到的蛋白可用于:

功能或相互作用研究
晶体筛选
结构分析
制备抗体
Features
Specifications
应用 Proteomics
结合能力 up to 9 mg/ml
N或C末端标签 Both
处理 manual/automated
规格 Strep-Tactin Superflow Plus: Large Scale; Strep-Tactin Superflow Plus Cartridge: medium scale
起始材料 cell lysates
支持/基质 Superflow Plus
标签 Strep-tag
产量 up to 9 mg/ml