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Ni-NTA Superflow Cartridges

利用液相色谱系统纯化His-tagged蛋白

  • 灵敏的一步纯化His-tagged蛋白
  • 高产量制备高纯度蛋白,至多50 mg/ml
  • 纯化过程快速方便,实验结果重复性高,适用于任何LC体系

Ni-NTA Superflow作为His-tagged蛋白纯化引用应用较多的树脂,目前提供1 ml和5 ml两种规格的预装柱,可用于液相色谱系统进行自动纯化,如FPLC、ÄkTA和BioLogic Systems,也可以使用注射器进行手动纯化。

Cat No./ID: 30721
Ni-NTA Superflow Cartridges (5 x 1 ml)
5 cartridges pre-filled with 1 ml Ni-NTA Superflow: for automated purification of His-tagged proteins using liquid chromatography systems
Cat No./ID: 30760
Ni-NTA Superflow Cartridge (1 x 5 ml)
1 cartridge pre-filled with 5 ml Ni-NTA Superflow: for automated purification of His-tagged proteins using liquid chromatography systems
Cat No./ID: 30761
Ni-NTA Superflow Cartridges (5 x 5 ml)
5 cartridges pre-filled with 5 ml Ni-NTA Superflow: for automated purification of His-tagged proteins using liquid chromatography systems
Cat No./ID: 30765
Ni-NTA Superflow Cartridges (100 x 5 ml)
100 cartridges pre-filled with 5 ml Ni-NTA Superflow: for automated purification of His-tagged proteins using liquid chromatography systems

Ni-NTA Superflow Cartridges适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
一项独立研究表明Ni-NTA损失的镍少于其他任何被测树脂。
一项独立研究表明Ni-NTA损失的镍少于其他任何树脂。含有多种添加剂的50柱体积的缓冲液流过含100 μl来自QIAGEN以及供应商G、S或I的树脂。采集流过液,样本依照DIN EN ISO 17025在德国Bochum的Weßling博士实验室进行电感耦合等离子体质谱分析。非变性缓冲液:50 mM磷酸钠;300 mM NaCl;10 mM咪唑,pH 8.0。变性缓冲液:100 mM磷酸钠;10 mM Tris•Cl;8 M尿素。
1
可靠的纯化,具有高度可重复性。
通过10个连续的纯化步骤纯化His-tagged pGAPase。等体积上样10 ml澄清的E. coli细胞裂解液,其中包含30 mg合成蛋白。每次纯化之间用0.5 M NaOH在原处清洗柱子。三个样品分为上样缓冲液、流出液和洗脱液。M:分子量标准。
2
使用含有多种成分的缓冲液高效一步纯化His-tagged蛋白。
图示蛋白由含有以下成分的缓冲液纯化获得:[A]还原剂(10 mM DTT)和[B]去污剂(1% n-十二烷基-β-D-麦芽吡喃糖苷)[C]S. cerevisiae中表达的人源GBP1(数据由德国隆大学分子医学中心Julia Fres提供)。M:分子量标准;C:澄清裂解液;F:流出液;W:洗涤液;L:裂解物;S:可溶部分;P:沉淀;E:洗脱液。
3
Ni-NTA优于其他树脂,能够获得高产量、高纯度的蛋白。
Ni-NTA优于其他树脂,能够获得高产量、高纯度的蛋白。使用Ni-NTA Superflow Cartridge或其他供应商提供的树脂按照操作手册纯化ERK2。M:分子量标准;C:澄清裂解液;F:流出液;W:洗涤液; E:洗脱液。
4
与IDA (其他树脂使用的配体)相比,Ni-NTA上额外的配位点(箭头标出)使得其能够更紧的结合镍。
5
可纯化纳克到克级的His-tagged蛋白。

See table 'Micro to large-scale purification of IL-1β for a biopharmaceutical project.'

Performance

Ni-NTA相较于其他树脂而言,在提供高产量高纯度的蛋白质方面,有优异的表现(参见Ni-NTA outperforms other resins to deliver high yields of high-purity proteins)。Ni-NTA Superflow镍离子脱落率最低(参见An independent study shows that Ni-NTA loses less nickel than any other tested resin)。而镍离子脱落会使其余带电的配体作为离子交换并结合非标记的蛋白,将污染洗脱组分。Ni-NTA耐受性强,甚至可在10 mM DTT存在的情况下纯化得到高纯度活性蛋白(参见The extra coordination site in Ni-NTA binds nickel ion more tightly than IDA)。

如下表所示,Ni-NTA产品在各个纯度规模都能获得高纯度蛋白Ni-NTA Superflow Cartridges式QIAGEN提供的His-tagged蛋白纯化解决方案中的一部分(参见Scalable purification of nanogram to gram amounts of His-tagged proteins)。

微型至大规模纯化IL -1β的生物制药项目
模型 模型体积 培养液体积 产量 恢复率(%) 纯度*
Ni-NTA Magnetic Agarose Beads (微型规模) 100 μl 1 ml 33 μg ~90% ~97%
Ni-NTA Superflow (小规模) 500 μl 320 ml 6 mg ~80% ~96%
Ni-NTA Superflow (中等规模) 10 ml 1.7 l 109 mg ~80% ~98%
Ni-NTA Superflow (大规模) 100 ml 18 l 2 g >88% ~97%
*使用Agilent Bioanalyzer确定(Protein 50 LabChip Kit)
Principle

Ni-NTA基质应用亲和层析法纯化His-tagged蛋白(参见Efficient one-step purification of His-tagged proteins)。Ni-NTA稳定性高,可以兼容缓冲剂组分,包括强变性剂、清洁剂甚至还原剂(见下表Reagents compatible with the His/Ni-NTA interaction)。这种灵活性使得研究人员可设计出最佳的纯化方案,同时受益于Ni-NTA卓越的分离特性,通常无需第二次纯化。

能与His/Ni-NTA兼容的试剂
变性剂 清洁剂 还原剂 其他  长期储存 
6 M Gu·HCl 2% Triton X-100 20 mM β-ME 50%甘油 4 M MgCl2 至多30%乙醇
8 M尿素 2% Tween 20 10 mM DTT 20%乙醇 5 mM CaCl2 或者100 mM NaOH
1% CHAPS 20 mM TCEP 20 mM 20 mM TCEP 20 mM咪唑 2 M NaCl
Procedure
应用灵敏的Superflow基质,流速可高达10 ml/min(1 ml预装柱)和40 ml/min(5 ml预装柱),有助于加快纯化过程,同时提高通量。预装柱可快速、简单的连接到液相层析系统或手动纯化的注射器上。纯化过程具有高度可重复性,确保之后可制备同样高品质的蛋白质(参见Highly reproducible and reliable purification)。
Applications

Ni-NTA基质可用于大规模His-tagged蛋白,以进行结构研究(如,蛋白结晶或NMR)、或者制备大量(克级)的生物医药产品。

Features
Specifications
应用 Proteomics
磁珠大小 60-160 µm
结合能力 Up to 50 mg/ml
快速蛋白液相色谱 Yes
重力流或离心柱 FPLC or syringe
N或C末端标签 Both
处理 Manual/Automated
规格 Large scale
起始材料 Cell lysate
支持/基质 Superflow
标签 6xHis tag
产量 Up to 50 mg (1 ml cartridge), up to 250 mg (5 ml cartridge)

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试剂盒操作手册 (2)
参考文献
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