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Ni-NTA Spin Kit

快速、小规模纯化His-tagged蛋白,同时提供离心柱、试剂、缓冲液和对照质粒

  • 15分钟内纯化至多300 µg His-tagged蛋白
  • 可在天然和变性条件下纯化
  • 一步法即可纯化得到95%的产物
  • 即用型离心柱,可用于快速自动化或手工纯化

Ni-NTA硅胶基质通过大孔硅胶与Ni-NTA相结合来优化材料,从而抑制相互之间的非特异性疏水作用。Spin Kit中的Ni-NTA Columns为便捷的小离心柱形式,可便利地处理多份平行样本。适用于功能性筛选工程蛋白质、选择克隆表达性长片段转录产物,以及表达水平比较。每个离心管可以纯化至多300 µg的His-tagged蛋白。Ni-NTA离心管可以在天然或变性的条件下,一步法纯化蛋白质。Ni-NTA Spin Kit是离心纯化His-tagged蛋白的完整试剂盒。

Cat No./ID: 31314
Ni-NTA Spin Kit (50)
50 Ni-NTA Spin Columns, Reagents, Buffers, Collection Tubes, 1 μg Control Expression Plasmid

Ni-NTA Spin Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
Ni-NTA Spin Column purification with the Ni-NTA.
1
Reproducible automated purification.

The indicated proteins were purified in duplicate under native conditions using Ni-NTA Spin Columns from cleared E. coli cell lysates derived from 5 ml LB cultures either manually or in an automated procedure on the QIAcube. CAT: chloramphenicol acetyl transferase; GFP: Green fluorescent protein; HIV-RT: Human immunodeficiency virus reverse transcriptase; IL-1b: Interleukin-1 beta. M: markers; C: cleared lysate (2 μl loaded per lane); E: elution fraction (3 μl loaded per lane).



 

2
Purification at different expression levels.
The 6xHis-tagged mouse DHFR was expressed at the indicated levels in E. coli, purified from 3 ml cultures using the Ni-NTA Spin Kit under denaturing conditions, and eluted in buffer at pH 5.9. Fractions were visualized by Coomassie staining after SDS-PAGE. 5 µl (of each 200 µl eluate) was loaded. 1: cell lysate; 2: flow-through; 3: first eluate; 4: second eluate.
Performance
Ni-NTA Spin Kit是快速、高效纯化蛋白质的理想试剂(参见Purification at different expression levels),同时也呈现了高度的可重复性(参见Reproducible automated purification)。
Principle

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System,包括Ni-NTA Spin Columns,原理是基于著名专利技术Ni-NTA(镍-次氮基三乙酸)树脂,用于纯化带有6个或者以上组氨酸残基His标签的蛋白质。该技术能够在天然或者变性的条件下,从任何表达体系中,一步法纯化大多数His-tagged蛋白。NTA有4个镍离子的螯合位,相比金属-螯合纯化系统只有3个与金属离子相互作用的位点,能够更紧密地与镍结合。额外的螯合位点防止镍离子脱落,从而拥有更强的结合能力,并且相比于其他金属-螯合纯化系统,该系统能制备更高纯度的蛋白质。QIAexpress体系可以从任何的表达体系中,包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌,纯化His-tagged蛋白。

Procedure

纯化His-tagged蛋白包括4个步骤:细胞裂解、蛋白结合、洗涤和洗脱(参见"Ni-NTA Spin Column purification with the Ni-NTA")。利用QIAexpress系统纯化重组蛋白并不取决于蛋白质或者His标签的三维空间结构。这一特性能够在天然或变性条件下,一步从稀释溶液或者粗裂解物中纯化蛋白。多至600 μl细胞裂解物可加注到Ni-NTA离心柱上。标签蛋白在2分钟快速离心结合到Ni-NTA硅胶基质上,无标签蛋白则流过基质。在洗涤步骤后,纯化的蛋白质在温和条件下洗脱(如pH降至5.9,或者加入100–500 mM咪唑)至100–300 μl体积。因为His标签较小,几乎不产生免疫原,通常无需去除。纯化的蛋白可以立即使用。蛋白质可以从多个小规模的表达培养物中纯化得到,只需约30分钟或者60分钟(自动化的QIAcube全自动核酸纯化仪操作流程)。强变性剂和清洁剂可以有效地溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体蛋白质。这些试剂能够高效地去除非特异性结合的污染物,可以包含在洗涤缓冲液中(参见下表)。在温和的条件下,加入100–250 mM咪唑作为竞争物或者降低pH值洗脱纯化的蛋白质。

与Ni-NTA–His兼容的试剂
试剂
6 M guanidine HCl
8 M尿酸
2% Triton X-100
2% Tween 20
1% CHAPS
20 mM β-ME
10 mM DTT
50%甘油
20%乙醇
2 M NaCl
4 M MgCl2
5 mM CaCl2
≤20 mM咪唑
20 mM TCEP
所列的试剂已成功地运用在所给的浓度上限中。.
Applications

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System提供可靠的一步法纯化蛋白质,适用于各种应用,包括:

  • 结构和功能研究
  • 蛋白结晶用于三维结构分析
  • 蛋白与蛋白,蛋白与DNA相互作用研究
  • 抗体制备
Features
Specifications
应用 Proteomics
磁珠大小 16–24 µm
结合能力 Up to 300 µg per spin column
重力流或离心柱 Spin column
处理 Automated
规格 Small scale
特性 Up to 95% homogeneity in one step
起始材料 Cell lysate
支持/基质 Macroporous silica
标签 6xHis tag

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