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Ni-NTA Magnetic Agarose Beads

高通量、小规模纯化His-tagged蛋白,利用His标签进行多种磁捕获研究

  • 信噪比高,重复性好
  • 宽范围的蛋白结合能力
  • 高效的筛选和浓缩流程
  • 适合于研究生物分子间的相互作用
  • 可提供全自动纯化方案

Ni-NTA Magnetic Agarose Beads是表面包被Ni-NTA Agarose亲和纯化基质的磁性颗粒,可固定和纯化带有His标签的重组蛋白。His标签上的组氨酸残基高特异性的结合到固定的镍离子上,一旦蛋白结合后,磁珠通过磁力被沉淀下来,洗去杂质,最后蛋白在天然或变性条件下经小体积洗脱得到。

Cat No./ID: 36111
Ni-NTA Magnetic Agarose Beads (2 x 1 ml)
2 x 1 ml nickel-charged magnetic agarose beads (5% suspension)
Cat No./ID: 36113
Ni-NTA Magnetic Agarose Beads (6 x 1 ml)
6 x 1 ml nickel-charged magnetic agarose beads (5% suspension)

Ni-NTA Magnetic Agarose Beads适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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小规模蛋白纯化。
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Ni-NTA Magnetic Agarose Beads的显微照片。
在小磁珠中可见磁性颗粒。
Principle

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System包括Ni-NTA Magnetic Agarose Beads(参见Micrograph of Ni-NTA Magnetic Agarose Beads),是基于获得专利的Ni-NTA(氨基三乙酸镍)树脂对含有6个或以上组氨酸残基(连续或交替)的亲合标签的蛋白的强选择能力。该技术可在天然或变性条件下,一步纯化几乎所有His-tagged蛋白(参见Protein purification with the Ni-NTA protein purification system)。NTA含有四个镍离子螯合位点,与镍的结合能力比其他仅有三个金属螯合位点的金属螯合纯化方法的结合能力强。多出的一个螯合位点可防止镍离子浸出,因此具有更强的结合能力,制备的蛋白纯度比金属螯合纯化方法的蛋白纯度高。QIAexpress技术适用于从杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中纯化His-tagged蛋白。

Procedure

纯化His-tagged蛋白包括4个步骤:细胞裂解,蛋白结合,洗涤和洗脱。利用QIAexpress体系纯化重组蛋白并不依赖于蛋白或His标签的三维空间结构。这一特性使Ni-NTA可在天然或变性条件下,从稀释溶液或裂解液中一步纯化蛋白。另外,可使用强变性剂和洗涤液对受体、膜蛋白和包涵体蛋白进行高效的溶解和纯化。可在洗涤液成分中加入高效去除非特异性结合的各种试剂(参见下表)。最后通过在温和条件下加入100–250 mM咪唑或降低pH值,洗脱得到纯化蛋白。

与His/Ni-NTA反应兼容的试剂
变性剂 洗涤液 还原剂 其他 盐  长期储存 
6 M Gu·HCl 2% Triton X-100 20 mM β-ME 50%甘油 4 M MgCl2 至多30%的乙醇
8 M尿素 2% Tween 20 10 mM DTT 20%乙醇 5 mM CaCl2 或100 mM NaOH
  1% CHAPS 20 mM TCEP 20 mM咪唑 2 M NaCl  
Applications

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System,包括Ni-NTA Magnetic Agarose Beads,可以可靠的一步纯化蛋白,产物适用于以下应用:

  • 蛋白结构和功能研究
  • 用于研究三维结构的蛋白结晶
  • 蛋白与蛋白、蛋白与DNA相互作用研究
  • 制备抗体
Features
Specifications
应用 Proteomics
磁珠大小 20–70 µm
结合能力 Up to 2 mg/ml suspension (5%)
处理 Automated/manual
规格 Micro scale
特性 High throughput (96-well)
起始材料 Cell lysate
支持/基质 Magnetic agarose beads
标签 6xHis tag
产量 <10 mg protein per column

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试剂盒操作手册 (2)
For Manual and automated Assays using 6xHis-tagged proteins Purification of 6xHis-tagged proteins
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参考文献
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