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Qproteome Plasma Membrane Protein Kit

用于高效分离高纯度质膜蛋白
  • 分离高纯度质膜蛋白组分
  • 标准化的操作带来高度重复的分离效果
  • 试剂盒操作方便迅速

Qproteome Plasma Membrane Protein Kit提供了一种快速、重现性好、标准化制备高纯度质膜蛋白组分的程序,只需使用普通离心机。

Cat No./ID: 37601
Qproteome Plasma Membrane Protein Kit
Buffers and reagents for 6 high-purity plasma membrane protein preparations

Qproteome Plasma Membrane Protein Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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Qproteome Plasma Membrane Protein Kit实验流程。
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高效分离质膜蛋白。
使用Qproteome Plasma Membrane Protein Kit从HeLa或NIH3T3细胞培养物中纯化质膜蛋白。采用SDS-PAGE分离细胞裂解物[CL]和洗脱组分[E],并通过Western印迹转移至硝酸纤维素膜上。使用蛋白特异性抗体和HRP偶联的二抗进行化学发光检测,检测不同细胞区室的标记蛋白。
Performance
基于Qproteome Plasma Membrane Kit专门的珠净化技术提供市售试剂中可获得的最高纯度的质膜蛋白组分(参见"Efficient isolation of plasma membrane proteins”)。
Principle

内膜及外膜蛋白如G蛋白连接受体(GPCRs)、生长因子和胞浆移动受体、受体相关的信号蛋白、以及信号通路蛋白等都是新药研究对象。目前科研工作者面临的主要问题就是如何获得没有胞浆蛋白污染的高纯度质膜蛋白组分。传统的制备方法不仅费时费力还需要有超速离心机设备,Qproteome Plasma Membrane Protein Kit只需普通台式离心机就能快速,高重复性地制备高纯度质膜蛋白。

Procedure
将收集的细胞加入低渗缓冲液温育,然后加入温和的变性剂后将细胞溶液反复经过针头和注射器使之破碎充分(参见"Qproteome Plasma Membrane Protein Kit procedure" )。快速离心除去未破碎细胞、细胞碎片、及其他细胞器。上清液中包含胞浆蛋白和微粒体,微粒体(直径为20–200 nm)由小囊泡组成,囊泡主要成分为内质网、高尔基体和质膜。加入配体和质膜组分结合,然后加入磁珠使配体、质膜颗粒发生沉淀。洗涤沉淀,洗脱液中含有的成分和配体发生竞争,从而在天然条件下洗脱得到质膜组分,同时配体仍和磁珠相结合。一般来讲1 x 107个细胞能得到30–100 µg质膜蛋白。
Applications

与其他方法不同,此方法无需对表面蛋白进行生物素化,得到的质膜蛋白能保持天然构象,具有全部生物学活性,适合质谱分析、受体研究、细胞信号及新药研究。

几乎没有污染物,极大方便了对低丰度蛋白物种的分析(例如,质谱分析)。

Features
Specifications
应用 SDS-PAGE, mass spectrometry
结合能力/产量 30–100 µg
分离组分 One fraction
样本大小 1 x 10e7 cells
起始材料 Cell cultures

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常见问题 (13)
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试剂盒操作手册 (1)
For fractionation of plasma membrane proteins from adherent cell culture samples  
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