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Qproteome Cell Compartment Kit

根据亚细胞定位进行蛋白分步抽提

  • 高重复性分离细胞蛋白组分
  • 可监测不同细胞生长状态下蛋白质的定位情况
  • 在进一步纯化和分析之前,根据亚细胞定位富集特定蛋白组分
Cat No./ID: 37502
Qproteome Cell Compartment Kit
For up to 10 subcellular fractionations*: Extraction buffers, Protease Inhibitor Solution, Benzonase®.

Qproteome Cell Compartment Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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检测不同生长条件的细胞中的蛋白位置。
[A] 在正常生长条件和[B] 加入一种凋亡诱导剂——星孢菌素4小时后的HeLa细胞的显微图片(上图)。下图显示了使用Qproteome Cell Compartment Kit处理细胞裂解物后的Western印迹。使用抗细胞色素c抗体检测印迹。众所周知,在凋亡过程中细胞色素c会从线粒体膜间隙易位至胞浆中,该过程可以通过检测凋亡细胞胞浆部分的细胞色素c反映出来。
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流程图。
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特异性分离蛋白。
NIH 3T3细胞各组分的Western印迹。采用SDS-PAGE从细胞浆(C)、细胞膜(M) 和细胞核(N) 中分离蛋白质(20 µg)。Western印迹后,使用[A] 膜联蛋白、[B] TIM23和[C] 核纤层蛋白抗体以及HRP偶联的二抗进行化学发光检测,检测各组分的特异性蛋白。
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定位组织样本中的蛋白。
使用Qproteome Cell Compartment Kit处理图示的大鼠组织。采用SDS-PAGE分离各组分(C:细胞浆,M:细胞膜,N:细胞核,S:细胞骨架),并通过Western印迹转移至硝酸纤维素膜上。采用标示细胞区室特异性的标记蛋白抗体检测印迹。
Performance
Qproteome Cell Compartment Kit利用简单有效的细胞间隔特殊定位法,从分离的细胞中定位标记蛋白(参见"Specific Separation of Marker Proteins" 和"Localization of Proteins in Cells Under Different Growth Conditions") 或者从组织样本中定位(参见"Localization of Proteins in Tissue Samples")。
Principle

试剂盒中包括4种提取缓冲液,能够从细胞裂解物或组织的细胞质、细胞膜、细胞核,以及细胞骨架相关的蛋白质顺序隔离。

Procedure

4种抽提试剂依次加入到细胞沉淀中并且离心分离出相应的片段(参见flowchart)。

另有组织样本实验流程可供选择,样本可在处理细胞沉淀操作前,用TissueRuptor在破碎的同时匀浆。

Applications

根据蛋白的亚细胞定位,对样本中的蛋白质进行分步抽提可以最大程度的富集低丰度蛋白。可用于研究酶、调控蛋白和结构蛋白的亚细胞定位情况;监测不同条件下蛋白在细胞内分布情况。

Features
Specifications
应用 SDS-PAGE, mass spectrometry
结合能力/产量 Varies
分离组分 Four fractions
样本大小 ~5 x 10e6 cells
物种 Eukaryotes
起始材料 Cell lysate

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