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Factor Xa Protease

在Factor Xa Protease识别位点去除6xHis标签

  • 高效去除6xHis标签(>90%)
  • 获得无任何来自pQE-30 Xa载体的氨基酸的蛋白

Factor Xa Protease是一个位点特异性内切酶,识别并切割蛋白C端的Ile-Glu-Gly-Arg序列。因为6xHis标签中含有其可识别的序列,Factor Xa Protease可有效去除由pQE-30 Xa载体表达的6xHis-tagged蛋白,且蛋白中不含来自载体的氨基酸。Factor Xa Protease在切割纯化蛋白后自身通过Xa Removal Resin去除。

Factor Xa Protease适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Performance
Factor Xa Protease可有效去除邻近多肽序列Ile-Glu-Gly-Arg的6xHis标签(参见"Digestion of 6xHis-tagged thioredoxin")。
Principle
尽管蛋白纯化后几乎无需从重组蛋白上去除6xHis亲和标签,但某些应用如X-ray结晶学或NMR结构分析需要去除标签。 

pQE-30 Xa表达载体编码Factor Xa Protease的识别位点,在N端6xHis-tag序列和多克隆位点之间。Factor Xa Protease识别Ile-Glu-Gly-Arg氨基酸序列,并切割C端结合精氨酸残基的多肽。如果目的基因在5'端通过载体的StuI限制位点进行平端克隆,则Factor Xa Protease切割纯化的重组蛋白N端将无任何来自载体的氨基酸。

Procedure

纯化的蛋白用Factor Xa Protease孵育,蛋白酶消化后,目的蛋白用两步法进行纯化。Factor Xa Protease与Xa Removal Resin结合后通过离心去除,接着切除下来的6xHis-tag多肽和未消化的6xHis-tagged蛋白被Ni-NTA亲和色谱吸附。无His-tag的蛋白出现在洗脱液中。

Applications

使用Factor Xa System得到的蛋白很适合于需要去除His标签的应用,包括:

  • 蛋白结晶学
  • 使用NMR核磁共振进行的蛋白结构研究
Features
Specifications
应用 Protein crystallography, structure determination studies using NMR
去除标签的效率 >90%
蛋白酶识别位点 Factor Xa Protease recognition site
特性 Protein free of vector-encoded amino acids
标签去除 Endoproteolytic