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pQE-30 Xa Vector

表达含有Factor Xa Protease识别位点的His-tagged蛋白

  • 易于构建含有Factor Xa Protease识别位点的克隆
pQE-30 Xa载体与pQE-30相似,但也可编码5'端6xHis标签编码区域所包含的Factor Xa Protease识别位点和3'端的多克隆位点。通过平末端StuI限制位点进行5'端克隆可以直接在Factor Xa Protease识别位点之后插入目的基因,无任何氨基酸密码子的介入。Factor Xa Protease切下在蛋白酶识别位点(IEGR)精氨酸残基之后的His标签多肽,使得重组蛋白在N端无任何来自载体的氨基酸。消化之后,Factor Xa Protease可被Xa Removal Resin去除。
Cat No./ID: 33203
pQE-30 Xa Vector
25 μg pQE-30 Xa Vector DNA

pQE-30 Xa Vector适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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pQE-30Xa.
Performance
pQE-30 Xa载体用于表达His-tagged硫氧还原蛋白,该标签随后被Factor X Protease完全去除(参见"Digestion of His-tagged thioredoxin with Factor Xa protease")。
Principle

尽管蛋白纯化后几乎无需从重组蛋白上去除His亲和标签,但对于某些应用如:X-ray结晶学或NMR结构分析,还是有必要去除标签。

pQE-30 Xa表达载体编码Factor Xa Protease的识别位点,在N端His标签序列和多克隆位点之间。Factor Xa Protease识别Ile-Glu-Gly-Arg氨基酸序列,并切割C端结合精氨酸残基的多肽。如果目的基因在5'端通过载体的StuI限制位点进行平端克隆,则Factor Xa Protease切割纯化的重组蛋白N端将无任何来自载体的氨基酸(参见"pQE-30 Xa")。

Procedure

纯化的蛋白用Factor Xa Protease孵育,蛋白酶消化后,目的蛋白利用两步法进行纯化。Factor Xa Protease与Xa Removal Resin结合后通过离心去除,接着切除下来的6xHis-tag 多肽和未消化的His-tagged蛋白被Ni-NTA亲和色谱吸附。

Applications

Factor Xa System处理蛋白,需使用pQE-30 Xa载体,Factor Xa System非常适用于需要去除蛋白His标签的应用,包括:

蛋白结晶学
使用NMR进行蛋白结构研究
Features
Specifications
三个阅读框 No
表达 In vivo
表达物种 E. coli
需要框内克隆 Yes
N或C末端标签 N-terminal tag
标签 6xHis tag
标签去除序列 Factor Xa recognition site
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