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NTA Agarose

利用重力流亲和层析进行蛋白纯化
  • 高亲和能力和高亲和容量
  • 可在天然或变性条件下进行蛋白纯化
  • 通过选择不同的金属离子细调纯化策略
不带电的NTA Agarose使得研究人员可选择特定金属离子来进行IMAC(固定金属亲和层析)操作,从而实现针对纯化策略的精细调整。其可使Ni2+、Cu2+、Zn2+或Co2+等金属离子有效固定,以便进行金属结合蛋白的IMAC纯化操作。NTA具有四个结合金属离子的螯合位点,相比其他金属螯合纯化体系而言具有更强的结合能力。这一特性有效降低了金属离子浸出和非特异性的结合,从而提升了蛋白结合容量和制备产物纯度。我们使用了一个专利的链接物将NTA与琼脂凝胶支持物连接起来,进而为金属离子的结合提供了最优的结合条件,并提高蛋白结合能力。
Cat No./ID: 30310
NTA Agarose (25 ml)
25 ml uncharged resin (max. pressure 2.8 psi)

NTA Agarose适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Performance
NTA Agarose能够通过重力流层析法实现高效的固定金属亲和层析操作(IMAC)。NTA含有四个镍离子螯合位点,相比其他仅有三个金属离子螯合位点的金属螯合纯化系统而言,其能够更紧密地结合金属镍。多出的一个螯合位点能够有效避免镍离子脱落,因此具有更强的结合能力,相比那些使用其他金属螯合纯化体系的方法,能够获得更大的结合量和更纯的蛋白制备产物。
Principle
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于专利的Ni-NTA(氨基三乙酸镍)树脂强大的选择性,对含有六个或以上组氨酸残基亲合标签的蛋白选择能力强。该技术适用于几乎任何种类的His标签标记蛋白和表达系统,可在天然或变性的条件下通过一步法完成蛋白纯化操作。NTA含有四个镍离子螯合位点,相比其他仅有三个金属离子螯合位点的金属螯合纯化系统而言,其能够更紧密地结合金属镍。多出的一个螯合位点能够有效避免镍离子脱落,因此具有更强的结合能力,相比那些使用其他金属螯合纯化体系的方法,能够获得更大的结合量和更纯的蛋白制备产物。QIAexpress系统能够从包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌在内的任何表达体系中纯化His-tagged蛋白。
Procedure
His-tagged蛋白的纯化操作包括四个步骤:裂解、结合、洗涤和洗脱。使用QIAexpress技术纯化重组蛋白无需依赖于蛋白的三维结构或6xHis标签。因此可实现在天然或变性条件下,从稀释溶液和细胞裂解液中一步纯化蛋白。可使用强变性剂和洗涤剂高效溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体的蛋白。洗涤缓冲液中可包含有能高效去除非特异性结合产物的试剂。在温和条件下加入100–250 mM咪唑作为竞争性洗脱试剂或降低pH值,可洗脱得到纯化蛋白。

6xHis/Ni-NTA结合的兼容试剂
变性剂 洗涤剂 还原剂 其他 盐溶液 长期储存
6 M Gu·HCl 2% Triton X-100 20 mM β-ME 50%甘油 4 M MgCl2 Up to 30%乙醇或100 mM NaOH
8 M Urea 2% Tween 20 10 mM DTT 20%乙醇 5 mM CaCl2
1% CHAPS 20 mM imidazole 2 M NaCl
Applications
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System能够提供可靠的一步蛋白纯化,其纯化产物适合于任何类型的后续应用,包括:
  • 结构和功能学研究
  • 用于三维结构检测的蛋白结晶
  • 蛋白与蛋白,蛋白与DNA相互作用研究(参见QIAexpress Assay System)
  • 制备抗体的免疫技术
Ni-NTA基质可作为固定的亲和配体,用于结合6xHis-tagged蛋白,以:
  • 研究核酸与结合蛋白之间的分子相互作用
  • 纯化抗体
  • 分离未标记的相互作用亚基或核酸
  • 研究配体-受体相互作用
Features
Specifications
应用 Proteomics
磁珠大小 45–165 µm
结合能力 Up to 50 mg/ml
Form 50% suspension in 30% ethanol
快速蛋白液相色谱 Yes
重力流或离心柱 Gravity flow
处理 Manual/Automated
规格 Large scale
特性 Batch and column purification
起始材料 Cell lysate
支持/基质 Sepharose CL-6B
产量 100 µg – 100 mg
fragment fix placeholder