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Ni-NTA Superflow Columns

通过重力流纯化His-tagged蛋白

  • 每个柱子可纯化至多75 mg的高纯度His-tagged蛋白
  • 即用型重力流纯化柱
  • 在天然或变性条件下进行纯化

Ni-NTA Superflow Column中预装了Ni-NTA Superflow基质于便捷的离心柱中,可配用BioRobot真空底座从澄清裂解液中纯化His-tagged蛋白。

Cat No./ID: 30622
Ni-NTA Superflow Columns (12 x 1.5 ml)
For 12 6xHis-tagged protein preps: 12 polypropylene columns containing 1.5 ml Ni-NTA Superflow

Ni-NTA Superflow Columns适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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Ni-NTA Superflow 96 Columns自动纯化流程。
Principle

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System,包括Ni-NTA Spin Columns,原理是基于著名专利技术Ni-NTA(镍-次氮基三乙酸)树脂,用于纯化带有6个或者以上组氨酸残基His标签的蛋白质。该技术能够在天然或者变性的条件下,从任何表达体系中,一步法纯化大多数His-tagged蛋白。NTA有4个镍离子的螯合位,相比金属-螯合纯化系统只有3个与金属离子相互作用的位点,能够更紧密地与镍结合。额外的螯合位点防止镍离子脱落,从而拥有更强的结合能力,并且相比于其他金属-螯合纯化系统,该系统能制备更高纯度的蛋白。QIAexpress体系可以从任何的表达体系中,包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌,纯化His-tagged蛋白。(参见"Ni NTA Superflow 96 Columns automated procedure")。

Procedure
His-tagged蛋白的纯化过程包括4个步骤:细胞裂解、蛋白结合、洗涤和洗脱(参见"Protein purification with the Ni-NTA Protein Purification System")。利用QIAexpress系统纯化重组蛋白并不取决于蛋白质或者6xHis标签的三维空间结构。这一特性能够在天然或变性条件下,一步从稀释溶液或者粗裂解物中纯化蛋白。强变性剂和清洁剂可以有效的溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体蛋白。这些试剂能够高效地去除非特异性结合的污染物,可以包含在洗涤缓冲液中(参见下表)。在温和的条件下,加入100–250 mM咪唑作为竞争物或者降低pH值洗脱纯化的蛋白。
His/Ni-NTA可兼容试剂
变性剂 清洁剂  还原剂  其他 长期储存 
6 M Gu·HCl 2% Triton X-100 20 mM β-ME 50%甘油 4 M MgCl2 至多30%乙醇
8 M尿素 2% Tween 20 10 mM DTT 20%乙醇 5 mM CaCl2 或者100 mM NaOH
  1% CHAPS 20 mM TCEP 20 mM咪唑* 2 M NaCl  
* 更高浓度的咪唑(100–250 mM)用于从Ni-NTA树脂上洗脱His-tagged蛋白。
Applications

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System提供可靠的一步法纯化蛋白质,纯化的蛋白质适用于各种应用,包括:

  • 结构和功能研究
  • 确定三维结构的蛋白结晶
  • 蛋白与蛋白,蛋白与DNA相互作用研究
  • 抗体制备
Features
Specifications
应用 Proteomics
磁珠大小 60–160 µm
结合能力 5–20 mg/ml
重力流或离心柱 Gravity flow or automated
每次制备的数量 1–24 samples per run
处理 Automated/manual
规格 Large scale
特性 Cross-contamination-free
起始材料 Cell lysate
支持/基质 Superflow
标签 6xHis tag
产量 <30 mg

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试剂盒操作手册 (2)
补充实验方案 (2)
The two protocols given below are for the use of the Ni-NTA Superflow 96 BioRobot® Kit in manual procedures. The kit has been specially designed and optimized for automated 6xHis-tagged protein purification on QIAGEN® BioRobot Systems. For more details of the advantages of BioRobot Systems see the Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit Handbook supplied with the kit or contact one of the QIAGEN Technical Service Departments or local distributors listed on the last page of the handbook.
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The following protocols have been designed for the use of Ni-NTA Superflow Columns on the QIAvac 6S vacuum manifold or in gravity-flow applications on the QIArack. Up to 15 mg 6xHistagged protein can be purified per column from cleared lysate derived from up to 1 liter of (E. coli) bacterial culture.
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参考文献
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