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Ni-NTA Spin Columns

快速、小规模纯化His-tagged蛋白质

  • 单个柱子可在15分钟纯化至多300 µg His-tagged蛋白
  • 可在天然和变性条件下纯化
  • 一步法即可纯化得到95%的产物
  • 即用型离心柱可快速平行处理多个样本

Ni-NTA硅胶基质通过大孔硅胶与Ni-NTA相结合来优化材料,从而抑制相互之间的非特异性疏水作用。Ni-NTA Spin Columns为便捷的小离心柱形式,可方便的处理多份平行样本。适用于功能性筛选工程蛋白质、选择克隆表达性长片段转录产物,以及表达水平比较。每个离心管可以纯化至多300 µg的His-tagged蛋白。Ni-NTA离心柱可以在天然或者变性的条件下,一步法纯化蛋白质。

Cat No./ID: 31014
Ni-NTA Spin Columns (50)
50 Ni-NTA Spin Columns, Collection Tubes

Ni-NTA Spin Columns适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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可靠的自动化纯化。
图示蛋白在非变性条件下使用Ni-NTA Spin Columns从澄清的E. coli细胞裂解液中纯化获得,反应重复两次, 细胞裂解液来自5 ml LB培养基,纯化过程可以手动或在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动化进行。CAT:氯霉素乙酰转移酶;GFP:绿色荧光蛋白;HIV-RT:人免疫缺陷病毒逆转录酶;IL-1b:白介素-1β。M:标记;C:澄清裂解液(每孔上样2 μl);E:洗脱条带(每孔上样3 μl)。
2
不同表达水平的纯化。
6xHis-tagged鼠DHFR在E. coli中的表达水平如图所示,使用Ni-NTA Spin Kit在变性条件下从3 ml 培养基中纯化,洗脱到pH 5.9的缓冲液中。SDS-PAGE后考马斯亮蓝染色看到条带。上样5 µl(每200 µl洗脱液)。1:细胞裂解液;2:流出液;3:第一次洗脱;4:第二次洗脱。
Performance
Ni-NTA Spin Columns提供快速的自动化纯化(参见Reproducible automated purification),适用于不同的表达水平(参见Purification at different expression levels)。
Principle

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System,包括Ni-NTA Spin Columns,原理是基于著名专利技术Ni-NTA(镍-次氮基三乙酸)树脂,用于纯化带有6个或者以上组氨酸残基His标签的蛋白质。该技术能够在天然或者变性的条件下,从任何表达体系中,一步法纯化大多数His-tagged蛋白。NTA有4个镍离子的螯合位,相比金属-螯合纯化系统只有3个与金属离子相互作用的位点,能够更紧密地与镍结合。额外的螯合位点防止镍离子脱落,从而拥有更强的结合能力,并且相比于其他金属-螯合纯化系统,该系统能制备更高纯度的蛋白。QIAexpress体系可以从任何的表达体系中,包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌,纯化His-tagged蛋白。

Procedure

His-tagged蛋白的纯化过程包括4个步骤:细胞裂解、蛋白结合、洗涤和洗脱(参见Ni-NTA Spin Column purification with the Ni-NTA)。利用QIAexpress系统纯化重组蛋白并不取决于蛋白质或者6xHis标签的三维空间结构。这一特性能够在天然或变性条件下,一步从稀释溶液或者粗裂解物中纯化蛋白。至多600 μl细胞裂解物可上样到Ni-NTA离心柱上。标签蛋白在2分钟内快速离心结合到Ni-NTA基质上,无标签蛋白则流过基质。在洗涤步骤后,纯化的蛋白质在温和条件下洗脱(如pH降至5.9,或者加入100–500 mM咪唑)至100–300 μl体积。因为His标签较小,几乎不产生免疫原,通常无需去除。纯化的蛋白可以立即使用。蛋白质可以从多个小规模的表达培养物中纯化得到,只需约30分钟或60分钟(自动化的QIAcube全自动核酸纯化仪操作流程)。强变性剂和清洁剂可以有效地溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体蛋白质。这些试剂能够高效地去除非特异性结合的污染物,可以包含在洗涤缓冲液中(参见下表)。在温和的条件下,加入100–250 mM咪唑作为竞争物或者降低pH值洗脱纯化的蛋白质。

与Ni-NTA–His兼容的试剂
试剂
6 M guanidine HCl
8 M尿素
2% Triton X-100
2% Tween 20
1% CHAPS
20 mM β-ME 
10 mM DTT
50%甘油
20%乙醇
2 M NaCl
4 M MgCl2
5 mM CaCl2
≤20 mM咪唑
20 mM TCEP
所列的试剂已成功地运用在所给的浓度上限中。
Applications

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System,包括Ni-NTA Spin Columns,提供可靠的一步式蛋白质纯化,产物蛋白适用于多种应用,包括:

  • 结构和功能研究
  • 蛋白结晶用于三维结构分析
  • 蛋白与蛋白,蛋白与DNA相互作用研究
  • 抗体制备
Features
Specifications
应用 Proteomics
磁珠大小 16–24 µm
结合能力 Up to 300 µg per spin column
重力流或离心柱 Spin column
处理 Automated/manual
规格 Medium scale
特性 Low-thoughput screening
起始材料 Cell lysate
支持/基质 Macroporus silica
标签 6xHis tag

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试剂盒操作手册 (2)
参考文献
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