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His-Strep pQE-TriSystem Vector Set

E. coli、哺乳动物细胞和昆虫细胞中平行表达His-Strep-tagged蛋白
  • 单个载体在三个体系中平行表达
  • 无需进行费时的亚克隆步骤
  • 高水平表达
  • 严谨的表达调控
  • 提高了毒性蛋白表达的稳定性
His-Strep pQE-TriSystem Vector Set中的载体含有E. coli、昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统的启动子。His-Strep pQE-TriSystem载体含有一个6xHis和一个Strep标签,可在Ni-NTA和Strep-Tactin基质上进行连续纯化,获得超纯(纯度>98%)蛋白。载体C端都含有一个标签,确保纯化全长蛋白。
Cat No./ID: 32942
His-Strep pQE-TriSystem Vector Set
pQE-TriSystem His-Strep 1 and pQE-TriSystem His-Strep 2 vectors, 25 µg each

His-Strep pQE-TriSystem Vector Set适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
高度灵敏的检测带有Strep标签的蛋白。
斑点杂交显示了Strep-tag Antibody的灵敏度。将标示量的蛋白质加至膜上,使用Strep-tag Antibody和辣根过氧化物酶偶联的抗小鼠的二抗,在ECL发光检测系统上进行检测。GFP:绿色荧光蛋白。
1
两步法亲和纯化流程。
2
两步即获得高纯度蛋白。
使用Two-Step Affinity Purification System纯化NIH-3T3细胞中表达的硫氧还蛋白。[A] 考马斯亮蓝染色的凝胶 [B] 银染的凝胶。
Performance
His-Strep pQE-TriSystem Vector Set表达的双标签蛋白可通过两步亲和纯化进行分离,获得超纯(纯度>98%)蛋白(参见Ultrapure protein in two steps)。
Principle
His-Strep pQE-TriSystem Vector Set可表达同时带有一个6xHis和一个Strep-tag II标签的蛋白。双标签蛋白经两步亲和纯化系统纯化,通过标准化流程简单、高效纯化超纯蛋白。此系统无需研发和优化蛋白特异性操作流程,可提高通量。带有两种标签的重组蛋白可在Ni-NTA和Strep-Tactin基质上进行连续纯化(参见"Two-step affinity procedure")。两个简单的亲和纯化步骤可获得完全有活性、全长、超纯的蛋白,适用于多种下游应用。
Procedure

使用pQE-TriSystem His-Strep载体在E. coli、昆虫细胞或哺乳动物细胞中可有效表达带有两个小亲和标签(6xHis和Strep-tag II标签)的重组蛋白。细胞裂解并澄清裂解液后,首先通过固定化金属亲和层析(IMAC)操作流程纯化蛋白,此流程基于经验证的6xHis-tag-Ni-NTA相互作用。使用咪唑从Ni-NTA基质洗脱后,重组蛋白(也带有Strep-tag II标签)直接加入到Strep-Tactin基质中(参见"Two-step affinity purification procedure")。无需改变缓冲液。使用生物素或脱硫生物素可从Strep-Tactin基质中洗脱蛋白。使用Strep-tag或Anti·His的小鼠单抗可高特异性和灵敏度地检测蛋白(参见"Highly sensitive detection of proteins carrying a Strep-tag")。

Applications
Two-Step Affinity Purification System非常适合需要高纯度但单独的His标签纯化难以达到的应用,如真核细胞的蛋白表达。Two-Step Affinity Purification System具有的超高纯度和便利性使其适用于:
  • 高纯度蛋白纯化
  • 结构和功能分析
  • 真核系统表达
     
Features
Specifications
三个阅读框 No
表达 In vivo
表达物种 E. coli, mammalian, cells, insect cells
需要框内克隆 Yes
N或C末端标签 N- and C-terminal tag
标签 6xHis tag
标签去除序列 No
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