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C-Terminus pQE Vector Set

高水平表达C端标记6xHis-tagged蛋白

  • 表达C端带有6xHis标签的蛋白,确保纯化得到全长蛋白
  • pQE-16载体表达低表达蛋白,如DHFR融合蛋白
  • pQE-16载体表达短肽链蛋白,如DHFR融合蛋白
此系统含有3个载体(pQE-16、pQE-60和pQE-70),用于表达C端带有6xHis标签的蛋白,推荐用于开放阅读框含有“暂停位点”的蛋白,这可能导致成熟前终止。pQE-60和pQE-70使编码序列的原始起始密码子代替pQE载体的ATG,保护真实的蛋白N端。在构建两个载体时,通过PCR或突变在插入片段的ATG密码子处分别导入NcoISphI限制性位点。pQE-16可表达C端带有6xHis标签的DHFR融合蛋白。DHFR(二氢叶酸还原酶)可提高抗原性和稳定性,推荐用于低表达蛋白或易水解的短肽。由于DHFR自身在小鼠和兔中几乎没有免疫原性,DHFR融合蛋白非常适合表位筛选。
Cat No./ID: 32903
C-Terminus pQE Vector Set
25 µg each: pQE-16, pQE-60, pQE-70

C-Terminus pQE Vector Set适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
QIAexpress pQE载体。
PT5: T5启动子;lac O: lac操纵子;RBS: 核糖体结合位点;6xHis: 6xHis标签序列;MCS: 克隆位点;Stop Conons(终止密码子):在所有3个读码框内;Col E1: Col E1复制起点;Ampicillin(氨苄青霉素):氨苄青霉素抗性基因。
1
pQE载体。
1:优化的启动子/操纵元件;2:合成的核糖体结合位点;3:6xHis标签编码序列;4:翻译终止密码子;5:两个强转录终止子;6:ColE1的复制起点;7:β-内酰胺酶基因(氨苄青霉素抗性)。图片未按实际比例显示。
Principle

QIAexpress pQE载体含有一个强大的噬菌体T5启动子(被E. coli RNA聚合酶识别),并含有两个lac操纵子遏制模块,用于在E. coli中严谨调控、高水平表达融合蛋白(参见"QIAexpress pQE vector")。在高水平lac遏制子存在的情况下,蛋白合成被有效断,细胞毒素载体的稳定性增强。pQE vectors可在重组蛋白的N端或C端带上6xHis标签。

QIAexpress pQE载体的元件
元件 描述
优化的启动子/操纵子元件 由噬菌体T5启动子和两个lac操纵子序列组成,提高lac遏制子结合的可能性,确保高效遏制T5启动子
合成核糖体结合位点RBSII 用于高效翻译
6xHis标签编码序列 在多克隆区域的5'或3'端
翻译终止密码 在所有阅读框都含有,方便构建表达载体
两个强大的翻译终止子 来自噬菌体ambda的t0和来自E. coli操纵子rrnB的T1,避免通读转录,确保表达载体稳定性
ColE1复制起始位点 来自pBR322
Beta-lactamase基因(bla) 赋予氨苄青霉素抗性
Procedure

编码目的蛋白的片段被克隆到合适的载体(详细信息可参见The QIAexpressionist Handbook)并转化至合适的E. coli表达菌株。加入IPTG诱导表达。Vector pQE-TriSystem载体可转化至E. coli,作为穿梭载体在昆虫细胞中表达重组蛋白,或转染至哺乳动物细胞。

Applications

QIAexpress Expression系统提供高水平蛋白表达,适用于多种应用,包括:

  • 纯化功能、构象有活性的蛋白 
  • 变性条件纯化,用于抗体制备
  • 结晶,用于确定三维结构
  • 蛋白间和蛋白与DNA间相互作用分析
Features
Specifications
三个阅读框 Yes
表达 In vivo
表达物种 E. coli
需要框内克隆 Yes
N或C末端标签 C-terminal tag
特性 Based on the T5 promoter transcription-translation system
标签 6xHis tag
标签去除序列 No

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试剂盒操作手册 (1)
A handbook for high-level expression and purification of 6xHis-tagged proteins
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