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Anti·His Antibody Selector Kit

经济高效选择His-tagged蛋白最佳检测抗体

  • 经济高效确定最佳抗体
  • 比较3种Anti·His Antibodies用于目标蛋白检测和应用的性能
  • 检测C端、N端和内部的His标签
  • 检测的特异性好,灵敏度高
  • 可忽略背景信号
单克隆小鼠Anti·His Antibodies(IgG1)用于检测带有His标签的重组蛋白。该产品含有三种抗体(RGS·His、Penta·His和Tetra·His),每种抗体有3 µg,以不含BSA的冻干粉形式提供,并配有30 ml的工作溶液。每种抗体可检测不同的His标签表位。Penta·His和Tetra·His抗体可检测N端、C端和内部的His标签,RGS·His抗体则只能检测N端带有RGS-His标签的蛋白。在检测大肠杆菌、酵母、昆虫或哺乳动物细胞裂解液时,抗体的交叉反应可以忽略。
Cat No./ID: 34698
Anti·His Antibody Selector Kit
RGS·His Antibody, Penta·His Antibody, Tetra·His Antibody, all BSA-free, 3 µg each

Anti·His Antibody Selector Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
酵母细胞中6xHis-tagged硫氧还蛋白的检测。
将图示量的6xHis-tagged纯化硫氧还蛋白与酵母细胞的粗提物(每个泳道中5 µg总蛋白)上样至15% SDS聚丙烯酰胺凝胶。完成电泳和Western转移后,使用Penta•His抗体检测6xHis-tagged蛋白,然后采用HRP偶联的兔抗小鼠IgG和ECL检测试剂进行化学发光检测。6xHPL:6xHis蛋白分子量标准。
1
QIAexpress Anti·His抗体的灵敏度。
使用QIAexpress Anti·His Antibodies(A:DHFR;B:DHFR;C:硫氧还蛋白;D:TNF-α;E:TFIIAγ;F:伴侣蛋白;G:DNA聚合酶;H:TFIIAαß;有关检测的标签位置和序列,请参见表格“使用QIAexpress Anti·His Antibodies检测的蛋白”)检测6xHis-tagged蛋白。将图示量的6xHis-tagged纯化蛋白上样至硝酸纤维素膜,使用图示1/2000稀释的Anti·His一抗进行检测,然后采用AP偶联的兔抗小鼠IgG和NBT/BCIP进行化学发光检测。
2
利用菌落杂交印迹鉴别阳性表达克隆。
使用Penta•His抗体进行阳性表达克隆的菌落杂交印迹检测。将编码DNA聚合酶的BamHI–Sal I片段克隆至pQE-31,然后转化至E. coli M15[pREP4],置于37°C过夜培养后影印接种至硝酸纤维素膜上,参照QIAexpressionist中的实验方案进行处理并进行NBT/BCIP检测。阳性表达克隆菌落较阴性克隆暗很多。
3
使用Penta•His抗体的免疫组织化学法。
鼠NIH/3T3成纤维细胞中的6xHis-tagged ß-半乳糖苷酶的免疫定位。转染后,使用Penta•His抗体及FITC/偶联的羊抗鼠IgG抗体检测标签蛋白,然后利用荧光显微镜观察。
Performance

His Antibodies与显色底物一起使用时,在Western印迹中的灵敏度可达2 ng,在点印迹中的灵敏度可达0.5 ng(参见"Sensitivity of QIAexpress Anti·His Antibodies")(检测不同蛋白的灵敏度可能有所不同)。

使用QIAexpress Anti∙His Antibodies检测蛋白
    蛋白  标签位置 序列
A     DHFR  N端                                MRGSHHHHHHGSVRPLNCIV..........
B     DHFR  C端            .........VYEKKDGSRSHHHHHH
C     Thioredoxin  N端                                MRGSHHHHHHGSSDKIIHLT..........
D     TNF-α  N端                                    MRHHHHHHQSTESMIRDV.........
E     TFIIAγ  N端                                MGSSHHHHHHSSGLVPRGSH.....
F     Chaperonin  C端            ..........AKIAKDGSRSHHHHHH
G     DNA polymerase  C端            ..........EDWLSAKERSHHHHHH
H     TFIIAαß  内部            ......QQQHQPQQQQHHHHHHHQQAQPQQTVP....
Principle

QIAexpress小鼠单克隆抗体是在确保高纯度和高活性的条件下制备得到。在无血清条件下进行杂交细胞培养,确保无病毒、支原体和免疫球蛋白污染。在生理pH条件下进行吸附色谱法纯化,制备出最高比例的天然抗体。Tetra·His Antibody和Penta·His Antibody均可检测C端、N端和内部的His标签。RGS·His Antibody则只能检测蛋白N端的His标签。

使用QIAexpress Detection Systems可高效检测His-tagged蛋白,尤其适用于以下应用:菌落原位杂交、点印迹和Wstern印迹(参见"Detection of 6xHis-tagged thioredoxin in yeast cells"、"Identification of positive expression clones by colony blotting"、"Sensitivity of QIAexpress Anti·His Antibodies"),阳性克隆筛选(参见"Identification of positive expression clones by colony blotting")。QIAexpress Anti·His Antibodies和偶联物还可用于很多其他应用,包括:免疫沉淀和ELISA、免疫细胞化学、免疫组织化学(参见"Immunohistochemistry with Penta·His Antibody")、蛋白定位和靶点分析、LabMAP分析。

Applications

使用QIAexpress Detection Systems可高效检测6xHis-tagged蛋白,尤其适用于以下应用:

  • 菌落原位杂交、点印迹和Western印迹
  • 阳性克隆筛选
  • 监控6xHis-tagged蛋白的表达水平和稳定性
  • 免疫沉淀和ELISA
  • 免疫细胞化学和免疫组织化学
Features
Specifications
检测 Secondary antibody required
检测的表位 HHHH/HHHHH/RGSHHHH
点印迹灵敏度,显色底物 0.5 ng
Western印迹灵敏度,显色底物 2 ng
印迹检测的底物 Dependent on secondary antibody
分析过程的底物 Dependent on secondary antibody
标签 His tag

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试剂盒操作手册 (1)
For Anti·His Antibodies, Anti·His HRP Conjugates, Penta·His™ Alexa Fluor® Conjugates, Penta·His Biotin Conjugate, Ni-NTA Conjugates, Tag·100™ Antibody, Streptavidin–R-PE, 6xHis Protein Ladder, Ni-NTA HisSorb™ Strips and Plates 
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