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REPLI-g UltraFast Mini Kit

用于从珍贵或少量样本中超快速,高度均一地进行全基因组扩增

  • 快速全基因组扩增,仅需1–1.5小时
  • 获得无限量DNA适合多种下游应用
  • 从各种起始样本中进行高重复性扩增
  • 高度稳定的DNA适合长期储存

基因组DNA量不足以进行基因组分析,这一问题可通过样本内全基因组DNA扩增解决。REPLI-g UltraFast Kit包含REPLI-g UltraFast DNA Polymerase,该聚合酶可在60–90分钟内高度均一、正确的对少量样本进行全基因组扩增,通常20 μl反应体系产量可达7 μg。起始样本可以是基因组DNA、新鲜或干血、口腔拭子、新鲜或冷冻组织和培养细胞等。扩增得到的DNA可即用于多种基因分析。

Cat No./ID: 150033
REPLI-g UltraFast Mini Kit (25)
DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 25 x 20 μl ultrafast whole genome amplification reactions
Cat No./ID: 150035
REPLI-g UltraFast Mini Kit (100)
DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 100 x 20 μl ultrafast whole genome amplification reactions

REPLI-g UltraFast Mini Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
对纯基因组DNA的扩增过程。
使用REPLI-g UltraFast Mini Kit扩增基因组DNA包括3个基本步骤。首先,样品需经过温和的碱变性,避免片段化和对模板DNA的损害。然后,样本被中和,最后再和REPLI-g UltraFast DNA Polymerase在30°C下孵育。
1
DNA扩增产量高。
使用REPLI-g UltraFast Mini Kit对基因组DNA样本(每个10 ng)和无模板对照(NTC)样本(不含模板DNA)进行扩增,不同时间后测定DNA产量。扩增60分钟后的平均产量是7 µg,扩增90分钟后平均产量是10–13 µg。45分钟后即可获得多至5 µg DNA,可快速用于下游基因分析。在无模板对照反应中未检测到DNA。
Performance
孵育90分钟后,可从20 µl反应体系中获得7 µl DNA。如果时间有限,45分钟后也可获得足以用于下游应用的产物(参见"Consistent and high yields of amplified DNA")。阴性对照样本(无模板DNA)不被扩增,能够可靠检测样本或污染DNA是否存在(参见"Consistent and high yields of amplified DNA")。
Principle

用于基因组分析的基因组DNA量通常十分有限。全基因组扩增技术通过对样本中的所有DNA进行全基因组扩增,为下游应用提供足量的DNA,克服这一问题。REPLI-g UltraFast技术可高度均一的进行全基因组扩增,序列偏差小。该方法基于MDA技术,采用独特的DNA聚合酶进行等温基因组扩增,可在较短时间内扩增得到长达100 kb的DNA产物,避免了基于PCR的扩增方法中常见的高序列偏差。此外,独特的碱性变性缓冲液确保了基因组DNA的温和变性,避免热变性导致的模板DNA片段化。因此可确保在下游应用中获得更加灵敏、更加可靠的结果。

Procedure
使用REPLI-g UltraFast Mini Kit进行全基因组扩增需要3个基本步骤。首先,对样本(10 ng纯化的基因组DNA、0.5 µl全血或300个组织培养细胞)进行温和的碱变性,避免模板DNA片段化。然后中和样本,加入REPLI-g UltraFast DNA Polymerase于30°C孵育。60分钟后可获得产物,扩增得到的DNA无需纯化,可即用于下游应用。
Applications

REPLI-g扩增得到的基因组DNA适合多种下游应用,包括:

  • 基因分型(如:SNP、STR、微阵列)
  • 终点法PCR、real-time PCR
  • 测序 
  • 比较基因组杂交 
Features
Specifications
扩增 Whole genomic DNA
应用 Genotyping, microarray, PCR, real-time PCR
变性步骤 Alkaline
最大上样量 10 ng DNA, 0.5 µl whole blood, ~300 cells/µl
所需最小吸液量 1 µl
质量评估 No
反应时间 60–90 minutes
反应体积 20 µl
每次处理样本量;通量 Mid
DNA起始量 >10 ng purified genomic DNA
起始材料 Genomic DNA, blood, cells
技术 Multiple Displacement Amplification (MDA)
产量 ~10 µg

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产品介绍与指南 (1)
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试剂盒操作手册 (1)
For fast whole genome amplification from purified genomic DNA, blood, and cells
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