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QIAGEN Large-Construct Kit

纯化至多50 μg BAC、PAC和P1 DNA或至多200 μg的柯斯质粒DNA和非基因组DNA

  • 高效去除基因组DNA污染
  • 转染级别纯度的高分子量DNA
  • 快速简单的操作

QIAGEN Large-Construct Kit提供重力流和阴离子交换柱,用于纯化大分子量的DNA。独特的ATP-dependent外切酶消化步骤,确保特异性去除基因组DNA。产物DNA的纯度相当于经过两次CsCl密度梯度离心得到的纯度,适用于转染级别的应用。

Cat No./ID: 12462
QIAGEN Large-Construct Kit (10)
10 QIAGEN-tip 500, Reagents, Buffers, ATP-Dependent Exonuclease

QIAGEN Large-Construct Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


1
高效去除基因组DNA。
对使用QIAGEN Large-Construct Kit或标准阴离子交换步骤分离的1 µg 105 kb BAC DNA重组载体进行ABI PRISM 7000 (TaqMan) 分析,如图所示。检测使用QIAGEN Large-Construct Kit获得的基因组DNA需要的扩增循环数较多,说明其中的污染基因组DNA含量较低。
2
阴离子交换树脂。
QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂专用于核酸纯化。预装的QIAGEN-tips通过重力流方式纯化,不会流干,最大程度地缩短了质粒制备所需的手工操作时间。
Performance
使用QIAGEN Large-Construct Kit纯化DNA,无基因组DNA的污染(参见"Efficient removal of genomic DNA")。基因组DNA的去除确保准确可靠的进行DNA定量,使一些敏感实验可在明确的和可重复的条件下进行。
Principle

QIAGEN Large-Construct Kit使用经优化的重力流操作,获得的DNA的纯度显著高于其他常规方法获得的DNA的纯度。独特的ATP-dependent外切酶消化步骤,确保特异性去除基因组DNA。

QIAGEN Large-Construct Kit含有的QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂专为核酸纯化设计。其出色的核酸分离特性可纯化得到高纯度DNA,相当于经过两次氯化铯梯度离心得到的纯度。预装的QIAGEN-tips(参见"Anion-exchange tips")运用重力沉降原理,减少了质粒制备过程所需的手工操作时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用苯酚、氯仿、溴乙锭和氯化铯等有毒物质,最大程度减小了对使用者及环境的危害。

Procedure

使用碱裂解法裂解多达500 ml的培养液后(参见"QIAGEN Plasmid Kit procedures"),使用试剂盒中的ATP-dependent外切酶进行消化,确保特异性去除基因组DNA及缺损的高分子量DNA。之后将样本上样至阴离子交换柱,在适当的低盐浓度和pH值条件下,质粒DNA与树脂特异性结合。用中等盐浓度的缓冲液洗涤,去除RNA、蛋白质、代谢物和其他小分子的杂质。用高盐缓冲液洗脱已去除基因组DNA的纯化质粒DNA。加入异丙醇使DNA浓缩和脱盐,之后离心收集。

Applications

QIAGEN Large-Construct Kit纯化获得的DNA适用于各种下游应用,包括:

亚克隆和鸟枪法制备DNA文库
对高分子量DNA直接进行测序
转染
Features
Specifications
应用 Subcloning, transfection, sequencing etc.
起始样本体积 <500 ml culture volume
质粒类型 BAC, PAC, P1, cosmid DNA
处理 Manual (centrifugation)
每次处理样本量;通量 1 sample per run
技术 Anion-exchange technology
每次运行时间或处理样本数 280 min
产量 <150 ug

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常见问题 (16)
参考文献
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