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REPLI-g Screening Kit

对少量或者珍贵样本,高通量手动或自动进行全基因组扩增
  • 获得无限量DNA满足多种下游应用
  • 对多个样本平行进行全基因组扩增
  • 高度稳定的DNA适合长期储存

基因组DNA量不足以进行基因组分析,这一问题可通过样本内全基因组DNA扩增解决。REPLI-g Screening Kit包含DNA聚合酶、新型缓冲液和试剂,可进行高度均一的全基因组扩增,序列偏差小。起始样本包括基因组DNA和培养细胞。该试剂盒温和的变性步骤使其适合手动或自动进行高通量DNA扩增实验,可通过多种基因分型分析进行快速变异筛查。扩增得到的DNA可即用于多种下游应用,无需纯化或定量。

REPLI-g Screening Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
REPLI-g筛选流程。
1
高分子量DNA的产量稳定。
在1%的琼脂糖凝胶中电泳40个通过REPLI-g全基因组扩增得到的DNA样本,使用SYBR® Green染料观察。平均产物长度通常大于10 kb。
2
Multiple displacement amplification (MDA) technology.
Primers (arrows) anneal to the template DNA and are extended at 30°C by Phi 29 polymerase, which moves along the DNA template strand, displacing the complementary strand, while becoming a template itself for replication. In contrast to PCR amplification, MDA does not require different temperatures and ends in very long fragments with low mutation rates.
Performance
REPLI-g Screening Kit的常规产量为每40 µl反应体系产生8 µg DNA。扩增得到的DNA适合多种下游应用,包括基因分型(如:SNP、STR、微阵列分析)、终点式PCR、real-time PCR和测序。均一的DNA产量对于高通量应用尤为重要,产物可用于下游基因分析,无需检测或调节DNA浓度。产物一般长于10 kb,长度范围在2 kb-100 kb之间(参见"Uniform yield of high-molecular-weight DNA")。
Principle
用于基因组分析的基因组DNA量通常不足。全基因组扩增技术通过对样本中的所有DNA进行全基因组扩增,为下游应用提供足量的DNA,克服这一问题。REPLI-g技术可高度均一的进行全基因组扩增,序列偏差小。该方法基于MDA技术,采用独特的DNA聚合酶进行等温基因组扩增,无需进行分离,可获得长达100 kb的DNA产物(参见"Schematic representation of REPLI-g amplification")。DNA 聚合酶具有3'→5'外切酶校对活性可在复制过程中维持高保真性,在抗外切酶的引物存在时用于获得高产量的DNA产物。扩增获得的DNA无需纯化或定量,可直接用于多种下游应用,包括基因分型(参见"Reliable SNP genotyping")、终点式PCR、real-time PCR和测序。
Procedure
这一简便、高效的技术可准确扩增REPLI-g Screening Handbook中指定样本的基因组DNA。首先裂解样本,在Buffer SB1中65°C孵育,使DNA变性。通过冷却至室温,停止变性。加入Buffer SB2和DNA聚合酶,于30°C过夜孵育至少10小时。REPLI-g Screening Kit具有多种优势,包括具有更高准确性的大体积移液步骤、兼容96微孔板和高效的快速操作流程,是手动或自动高通量变异筛查的理想选择(参见"REPLI-g screening procedure")。
Applications

REPLI-g扩增得到的DNA适合多种下游应用,包括以下高通量基因分型:

  • 基因分型(例如:SNP、缺失、插入)
  • 终点式PCR、real-time PCR
  • 测序
Features
Specifications
扩增 Whole genomic DNA
应用 Genotyping, sequencing
变性步骤 Alkaline
Handling time for 96 samples 20 minutes
最大上样量 10 ng DNA, 0.5 µl whole blood, >600 cells/µl
所需最小吸液量 1 µl
质量评估 No
反应时间 10–16 hours (overnight)
反应体积 40 µl
每次处理样本量;通量 High
DNA起始量 >10 ng purified genomic DNA
起始材料 Genomic DNA, blood, cells
技术 Multiple Displacement Amplification (MDA)
产量 ~8 µg