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REPLI-g Mitochondrial DNA Kit

对人类线粒体DNA进行高度均一的全基因组扩增

  • 克服了分离线粒体DNA耗时的问题
  • 从总DNA中选择性扩增线粒体DNA
  • 扩增得到多达4 µg的高纯度线粒体DNA

REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可从DNA样本中选择性扩增线粒体DNA,无需预先分离线粒体DNA。该试剂盒含有DNA聚合酶、缓冲液和试剂,可利用MDA技术从少量样本中的总DNA中特异性、均一的扩增人类线粒体DNA。这一简便的操作可富集线粒体DNA,且细胞核DNA污染最小,避免进行耗时的线粒体DNA分离纯化,提高了下游分析的灵敏度。

Cat No./ID: 151023
REPLI-g Mitochondrial DNA Kit (25)
DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 25 x 50 μl mitochondrial DNA specific whole genome amplification reactions

REPLI-g Mitochondrial DNA Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
扩增线粒体DNA。
使用REPLI-g Mitochondrial DNA Kit对含有约100 fg线粒体DNA的0.1 ng总DNA(代表约15个细胞)进行扩增。扩增后的线粒体DNA总产量达4 µg,相当于线粒体DNA的量增加了4 x 107倍。
1
纯化线粒体DNA的实验流程。
使用REPLI-g Mitochondrial DNA Kit扩增线粒体DNA包括两个基本步骤。首先,总DNA样本在REPLI-g mt Reaction Buffe中75°C变性,再冷却。然后,加入REPLI-g DNA Polymerase进行等温扩增反应。
Performance
总DNA中一般含有大约0.1%的线粒体DNA(如:1 ng人类总DNA含有1 pg线粒体DNA)。REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可以特异性扩增人类线粒体全基因组,50 µl反应体系可扩增获得大约4 µg高纯度线粒体DNA。这相当于4000万倍的扩增效果,依据起始量会有所不同(参见"Enrichment of mitochondrial DNA")。产物的平均长度一般长于10 kb。
Principle

常见的获得线粒体DNA的限制之一为需要将线粒体DNA与细胞核DNA分离,在需要提高线粒体DNA标记物分析的灵敏度时尤其如此。分离过程涉及很多耗时的步骤,有可能导致线粒体DNA的损失。REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可在含有总DNA的样本中直接扩增获得线粒体DNA,解决了这一问题。

REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可快速、高度均一的对线粒体基因组进行全基因组扩增。该方法基于MDA技术,采用新型独特进行性的DNA聚合酶进行等温基因组扩增。REPLI-g DNA Polymerase凭借其活跃的进行性置换反应,可扩增得到100 kb的DNA,无需预先分离DNA。与PCR扩增方法相比,这种方法能很大程度减小序列偏差和不均一位点的出现。

Procedure
使用REPLI-g Mitochondrial DNA Kit扩增线粒体DNA涉及两个基本的步骤(参见"Purified mitochondrial DNA procedure")。首先,将含有总DNA的样本置于REPLI-g mt Reaction Buffer中75°C孵育五分钟,使其变性;通过冷却,使变性停止。然后,加入REPLI-g DNA Polymerase,在33°C开始恒温扩增8小时。
Applications

REPLI-g技术扩增获得的线粒体DNA可用于多种下游应用,包括:

  • 基因分型(例如:SNP、缺失、插入)
  • 终点式PCR、real-time PCR 
  • 测序
Features
Specifications
扩增 Whole genomic DNA
应用 Genotyping, sequencing, RFLP
变性步骤 Heat
最大上样量 10 µl template DNA
所需最小吸液量 1 µl
质量评估 No
反应时间 ~8 hours (overnight)
反应体积 50 µl
每次处理样本量;通量 Mid
DNA起始量 ~10 ng purified total DNA
起始材料 Genomic human DNA
技术 Multiple Displacement Amplification (MDA)
产量 ~4 µg

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