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QIAamp cador Pathogen Mini Kit

从各种动物样本中纯化病毒RNA、DNA和细菌DNA

  • 相同的实验方案,适合病毒RNA、病毒DNA和细菌DNA
  • 适合各种动物样本,包括全血、血清和组织
  • 适合从未稀释的动物全血中纯化病毒RNA
  • 有效去除抑制剂和污染物
  • 纯化的核酸可即用于real-time PCR或RT-PCR
QIAamp cador Pathogen Mini Kit简化了从各种动物样本中纯化病毒RNA、DNA和细菌DNA的流程,样本包括未稀释的全血、血清、 拭子和组织。通过快速的离心柱操作去除污染物和抑制剂,得到的病原体核酸可即用于各种下游应用,如real-time PCR和RT-PCR。
Cat No./ID: 1069974
Buffer VXL (30 ml)
Buffer VXL (30 ml)
Cat No./ID: 54104
QIAamp cador Pathogen Mini Kit (50)
For 50 RNA/DNA preps: 50 QIAamp Mini Spin Columns, Carrier RNA, Proteinase K, Collection Tubes (2 ml), RNase-free buffers
Cat No./ID: 54106
QIAamp cador Pathogen Mini Kit (250)
For 250 RNA/DNA preps: 250 QIAamp Mini Spin Columns, Carrier RNA, Proteinase K, Collection Tubes (2 ml), RNase-free buffers

For laboratory use. Not for use in veterinary diagnostic procedures. No claim or representation is intended to provide information for the diagnosis, prevention, or treatment of a veterinary disease.



0
具有高度可重复性的核酸分离。
将RNA病毒加入不同动物的全血样本中。3天对样本重复处理三次。RT-PCR数据显示了较高的可重复性,误差范围为±1 S.D。
1
成功分离细菌DNA。
将革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌加入不同的动物样本中。如有需要,可进行适当的预处理(B1用于牛血,B2用于拭子培养基,B2改良版用于牛粪便)。PCR数据显示在所有情况下,细菌DNA的分离均很成功。3次QIAcube全自动核酸纯化仪运行的误差范围是±1 S.D。
2
手动和自动处理的对比。
将RNA病毒加入牛血清中,手动运行以及在QIAcube全自动核酸纯化仪上运行核酸分离实验方案。纯化重复样本的RT-PCR扩增数据显示了较高且一致的分离效率和线性度。灰线:手动分离。蓝线:自动化分离。红线:内参。
Performance

数据显示,采用手动和自动实验方案纯化病毒RNA可得到同样高的纯化效率(参见"Comparison of manual and automated processing.")。牛血清中掺入来自细胞培养基的病毒颗粒。样本用牛血清按1:10倍比稀释,两个同样的样本用QIAamp cador Pathogen Mini Kit手动纯化或在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动纯化。使用QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit,配合靶标特异性引物和探针检测病毒RNA。

试验中和试验间的高可重复性表明操作流程十分灵敏(参见"High repeatability of nucleic acid isolation.")。不同动物的全血样本中掺入来自细胞培养基的哦病毒颗粒,然后在-20°C冷冻。使用QIAamp cador Pathogen Mini Kit在不同的三天对相同样本进行三次重复处理。使用QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit,配合靶标特异性引物和探针检测病毒RNA。

此试剂盒也可从动物样本中成功纯化细菌DNA,见图"Successful isolation of bacterial DNA"。不同动物样本掺入革兰氏阴性或革兰氏阳性菌并预处理(参见"Pretreatments for the QIAamp cador Pathogen Mini Kit protocol"),然后在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动纯化。成功纯化细菌DNA。使用QIAgility对两个细菌靶标通过反应混合液建立平行的PCR反应体系,使用QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit,配合靶标特异性引物和探针扩增细菌DNA。

Principle

QIAamp cador Pathogen Mini Kit整合了几个基于离心柱技术的样本制备试剂盒的特点,可从动物体液和组织样本中纯化病毒RNA、DNA和细菌DNA。离心柱操作流程使用优化的缓冲液和酶,可裂解样本并稳定致病菌核酸。RNA和/或DNA结合到QIAamp硅胶膜上,污染物穿过。漂洗缓冲液可完全去除PCR抑制剂,如二价阳离子和蛋白,再用Buffer AVE洗脱得到纯化的致病菌核酸。

使用QIAamp cador Pathogen Kit从动物样本中纯化的致病菌RNA和DNA适用于real-time PCR和RT-PCR等下游应用。

与基于硅胶膜技术的其他试剂盒相比,QIAamp cador Pathogen Mini Kit可处理多至200 µl未稀释的全血样本,不会堵塞滤器。见表“QIAamp cador Pathogen Mini Kit的主要特点”。

QIAamp cador Pathogen Mini Kit的主要特点
规格和处理 Mini离心柱,手动离心流程或使用QIAcube全自动核酸纯化仪的自动离心流程
靶标核酸 病毒RNA、病毒DNA和细菌DNA
样本来源类型 动物全血、血清、血浆、其他体液、拭子、清洗液和组织
样本大小 多至200 μl或25 mg
制备时间 20到40分钟
洗脱体积 50到150 μl
Procedure

大部分常见的液体样本都可使用主要的操作流程直接处理,包括裂解、结合、漂洗和洗脱步骤,详见“原理”部分。

组织样本和含难裂解细菌的样本需要适当的预处理(见表“QIAamp cador Pathogen Mini Kit操作流程的预处理”)。预处理后,样本可按照液体样本的操作流程处理(参见"Processing of various sample types and targets"),可手工处理或在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动化处理。

QIAamp cador Pathogen Mini Kit操作流程的预处理
名称应用
Pretreatment B1 用于全血中的难裂解细菌*或预处理组织
Pretreatment B1 用于全血中的难裂解细菌*或预处理组织
Pretreatment B2 用于无细胞液体中的难裂解细菌*
Pretreatment B3 用于大体积无细胞液体中的易裂解细菌
Pretreatment T1 组织的机械破碎,用于提取病毒RNA和DNA
Pretreatment T2 组织的酶消化,用于提取病毒RNA和DNA
Pretreatment T3 组织的快速部分破碎,用于提取病毒RNA、DNA和细菌DNA
Pretreatment T4 从难裂解组织中有机提取病毒RNA、DNA和易裂解细菌*中的DNA
* 革兰氏阳性菌由于含有较厚的细胞壁,难于裂解。而一些革兰氏阴性菌也不易裂解, pretreatment B1或B2有一定帮助。
Applications

QIAamp cador Pathogen Mini Kit纯化的高品质病毒RNA、病毒DNA和细菌DNA适用于各种下游应用,包括real-time PCR和RT-PCR,用于:

动物病原体检测
动物病原体基因分型
流行病学 
传染性疾病研究