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PAXgene Tissue DNA Kit

从固定和稳定于PAXgene Tissue Container的组织中纯化DNA

  • 固定、稳定和纯化的完整系统
  • 从组织中纯化高品质DNA
  • 保持组织形态

固定和储存于PAXgene Tissue Container的组织样本可后续经石蜡包埋,用于病原体研究和后续的DNA、RNA和/或miRNA研究时,使用PAXgene Tissue DNA Kit从固定和稳定于PAXgene Tissue Container的组织中纯化DNA,纯化基于离心柱形式的硅胶膜DNA纯化技术。配合容器,该试剂盒为分子分析提供从采样、固定和稳定到高品质DNA纯化的完整解决方案。

Cat No./ID: 767134
PAXgene Tissue DNA Kit (50)
For 50 DNA preps: PAXgene DNA Mini Spin Columns, Processing Tubes, Microcentrifuge Tubes, Carrier RNA, and Buffers; to be used in conjunction with PAXgene Tissue Containers

仅限于科研应用,不适用于诊断,不为疾病的诊断、预防或治疗提供参考信息。


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PAXgene Tissue DNA实验流程。
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从固定并稳定在PAXgene Tissue Containers中的不同类型组织中纯化高品质DNA。
来自不同器官的组织用PAXgene Tissue Fix固定3小时,转移到PAXgene Tissue Stabilizer中在室温下储存24小时。处理完成后,使用PAXgene Tissue DNA Kit从石蜡包埋的组织切片中纯化DNA。M:标记。
Performance
应用PAXgene Tissue DNA Kit纯化的总DNA纯度非常高,DNA A260/A280比为1.7–1.9,同时吸光度扫描显示其在260 nm处有对称峰,证实是高纯度的基因组DNA。污染最小化,并且纯化所得DNA可直接用于下游应用,无检测到的PCR抑制。采集器和试剂盒配合使用,为分子分析提供从采样、固定和稳定到高品质DNA纯化的完整解决方案(参见"High-quality DNA from different tissue types fixed and stabilized in PAXgene Tissue Containers")。
Principle

目前传统组织学所使用的组织固定方法对分子分析的应用带来限制。含有福尔马林的固定剂与生物分子交联,修饰核酸和蛋白质。在组织固定、储存和处理过程中,交联导致核酸降解。因为无法完全去除交联,其引起的化学修饰将抑制敏感的下游应用,如定量PCR或RT-PCR。为了实现对同一样本进行分子病理检测和传统病理检测,需要一种方法在固定分子的同时保存组织形态。

PreAnalytiX研制了PAXgene Tissue System以满足这些需求。该系统包括组织采集装置(PAXgene Tissue Container用于采集、固定、储存及运输人类组织样本)以及用于纯化总RNA、DNA或miRNA的试剂盒。PAXgene Tissue Container可进行组织固定,用于组织病理学研究;也可从同一样本中纯化高纯度核酸,用于分子分析。固定和稳定方法保持了组织形态学,福尔马林固定组织中同时存在没有破坏性交联和降解的完整核酸。

为了分离基因组DNA,该体系需要应用PAXgene Tissue Containers采集和稳定组织,然后应用PAXgene Tissue DNA Kit分离和纯化DNA。
Procedure

PAXgene Tissue Container是预装有2种试剂的双腔容器。PAXgene Tissue Fix组织固定液快速浸润并固定组织。组织固定后,将其从PAXgene Tissue Fix中移出,转移到同一容器中含有PAXgene Tissue Stabilizer稳定液的另外一个腔内。组织储存在PAXgene Tissue Stabilizer稳定液中,其核酸和组织形态可在室温下稳定3–7天,在2–8℃下可稳定2–4周,不同组织的保存时间不同。储存于–15–30℃时,组织形态和核酸完整性可能稳定至少26个月。

固定了的样本可包埋于石蜡中,用于组织学研究。从PAXgene Tissue固定、石蜡包埋(PFPE)的组织样本中纯化核酸可在石蜡包埋之前或之后进行。

PAXgene Tissue DNA Kit提供3种不同操作流程,用于从PAXgene Tissue Containers固定和稳定的组织中提取基因组DNA。

组织裂解在裂解缓冲液、Buffer TD1中进行,使用蛋白酶K进行消化。缓冲液条件应结合Buffer TD2和乙醇进行调整,确保提供最佳的DNA结合条件,然后将裂解液装到PAXgene DNA离心柱上。在离心过程中,DNA会选择性地结合到硅胶膜上,污染物则流过柱子。分别用洗涤缓冲液TD3和TD4进行2次有效洗涤,去除剩余的污染物和酶抑制剂,然后用低盐洗脱缓冲液Buffer TD5洗脱DNA,可即用于下游应用(参见"The PAXgene Tissue DNA procedure")。

Applications

纯化所得DNA可即用于各种下游应用,包括:

PCR和定量real-time PCR
Southern印迹
药物基因组研究
SNP发现和SNP基因分型
Features
Specifications
应用 PCR, qPCR, real-time PCR
洗脱体积 45–70 µl
规格 96-well plate
主要样本类型 Tissue samples
处理 Manual (centrifugation or vacuum)
样本量 25–100 mg
技术 Silica technology
Time per run Varies
产量 Varies

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产品介绍与指南 (3)
Two worlds in one sample
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For isolation and purification of genomic DNA from tissue samples stabilized using the PAXgene Tissue System 

 


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Moving toward excellence and standardization in tissue collection and fixation

 


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试剂盒操作手册 (1)
For isolation and purification of genomic DNA from tissue samples stabilized in PAXgene Tissue Containers
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参考文献
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