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RNAi Human/Mouse Starter Kit

方便的构建RNA干扰实验条件

  • 用于RNA干扰实验建立和优化的全套对照
  • 低浓度siRNA即可实现高效转染
  • 通过观察细胞死亡,便利的进行转染优化
  • 灵活地选用QIAGEN提供的其他工具进行沉默效果的确定

RNAi Human/Mouse Starter Kit可便利的建立siRNA介导的RNA干扰实验,优化转染条件,进行常规的对照实验。该试剂盒包含的AllStars Negative Control siRNA是目前经过最全面验证的阴性对照siRNA,还含有MAPK1阳性对照siRNA、AllStars Hs Cell Death Control siRNA和HiPerFect Transfection Reagent。

RNAi Human/Mouse Starter Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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定量RT-PCR显示了高效的MAPK1敲除。
使用不同浓度的阳性对照MAPK1 siRNA及非沉默siRNA转染 [A] HeLa细胞、[B] MCF-7细胞和 [C] NIH/3T3细胞。48小时后,裂解细胞,使用RNeasy Mini Kit分离总RNA。使用QuantiTect Kit进行定量real-time RT-PCR。利用GAPDH表达量对MAPK1的表达进行标准化,并利用未处理细胞RNA的标准曲线进行定量。
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在若干细胞系中的MAPK1蛋白表达。
Western印迹分析显示了各种人和小鼠细胞系中MAPK1的表达。同时使用抗微管蛋白一抗检测微管蛋白,并用作内部上样对照。
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Western印迹分析显示了高效的MAPK1基因敲除。
使用HiPerFect Transfection Reagent,将靶向人和小鼠MAPK1 mRNA常见序列的阳性对照siRNA或非沉默siRNA(对照siRNA)转染至MCF-7细胞中。转染并孵育后,利用western印迹分析测定蛋白表达。同时分析未转染细胞。
Performance
RNAi Human/Mouse Starter Kit提供高效、经验证的试剂和siRNAs,确保成功的对照实验(参见"Western blot analysis shows effective MAPK1 knockdown" 和 "Quantitative RT-PCR shows effective MAPK1 knockdown")。
Principle

对照和优化实验对于启动RNAi实验或在新细胞系中建立RNAi是必需的。此外,合适的对照实验得到的数据对于全面、严谨地分析RNAi实验结果也很重要。非沉默阴性对照可作为非特异性沉默效果的对照。阳性对照siRNA提供高水平的基因敲除,可与正在研究的siRNA平行转染,以确保最佳的条件和确认实验结果。RNAi Human/Mouse Starter Kit提供阳性和阴性对照siRNA,可在人和小鼠细胞系中简单设置对照和启动实验。此外,还包括人细胞的细胞死亡表型对照,可以简单建立和监测转染条件。

高度验证的siRNA,可作为阴性对照并监测转染

RNAi Human/Mouse Starter Kit包括AllStars Negative Control siRNA。AllStars Negative Control siRNA是目前经全面验证过的阴性对照siRNA。这种siRNA与任何已知的哺乳动物基因都没有同源性。它经过Affymetrix GeneChip芯片和各种细胞实验验证,对于基因表达和表型具有最小的非特异性效果。克隆实验确认AllStars Negative Control siRNA进入RISC。

MAPK1 siRNA,非常合适的阳性对照

试剂盒还包括针对人和小鼠MAPK1 mRNA共同序列的经验证的siRNA。蛋白激酶MAPK1 (也被称作Erk2或MAPK2)在广泛的人和小鼠细胞系中表达。Western印迹分析人和小鼠细胞上清,发现MAPK1普遍表达(参见"Expression of MAPK1 protein in several cell lines")。试剂盒中的阳性对照siRNA是高纯度的siRNA,与人和小鼠MAPK1基因序列具有100%的同源性。MAPK1阳性对照siRNA几乎可完全消除MAPK1在人和小鼠细胞系中的表达。该阳性对照可进行常规转染,确保实验条件保持一致。

Procedure
通过观察细胞死亡,简单监测转染

AllStars Hs Cell Death Control siRNA是高度有效的siRNA混合物,可作用于对细胞存活所必需的普遍表达的人类基因。将这些基因敲除后可诱发高度的细胞死亡,可在光学显微镜下观察到。AllStars Hs Cell Death Control siRNA是siRNA转染优化的有用工具,可作为人类细胞的阳性对照常规使用。

方便检测基因沉默

定量RT-PCR可在mRNA水平上对敲除进行检测(参见"Quantitative RT-PCR shows effective MAPK1 knockdown")。QIAGEN提供QuantiTect Primer Assays,这种即用型、经验证的引物可在基于SYBR® Green法的real-time RT-PCR中灵敏和准确的定量。人类、小鼠和大鼠基因的QuantiTect Primer Assays和siRNAs都可GeneGlobe上方便地在线订购。

使用低浓度siRNA,即可高效转染

RNAi Human/Mouse Starter Kit包含HiPerFect Transfection Reagent,使用低浓度siRNA即可实现高效的siRNA转染和真核细胞敲除。研究表明使用低浓度siRNA可避免脱靶效应,而脱靶效应可能导致RNAi实验产生误导性结果。

Applications
RNAi新实验的建立
优化转染 
常规对照实验
Features
Specifications
应用 Routine control experiments, transfection optimization...
细胞类型 Human and mouse cells
对照 Positive control for mouse and human MAPK1, nonsilencing control siRNA
特点 High transfection efficiency with low siRNA concentrations
核酸 siRNA
可转染的次数 >160 transfections per kit
转染类型 Transient transfection