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HiPerFect Transfection Reagent

真核细胞的siRNA和miRNA转染
  • 低浓度条件下的siRNA高效转染
  • 高效转染原代细胞,细胞存活率高
  • 高效转染悬浮细胞和巨噬细胞
  • TransFect Protocol Database中有针对特殊细胞类型的实验方案
  • 高效转染miRNA模拟物或抑制剂
HiPerFect Transfection Reagent是一种阳离子和中性脂组成的独特混合物,能够有效摄入siRNA和有效释放细胞内部的siRNA,即使使用低浓度的siRNA也可高效敲除基因。除了siRNA,HiPerFect Transfection Reagent还适用于低通量和高通量的转染miRNA模拟物或抑制剂。TransFect Protocol Database中有适用于特殊细胞类型的实验方案。
Cat No./ID: 301704
HiPerFect Transfection Reagent (0.5 ml)
HiPerFect Transfection Reagent for up to 166 transfections in 24-well plates or up to 666 transfections in 96-well plates
Cat No./ID: 301705
HiPerFect Transfection Reagent (1 ml)
HiPerFect Transfection Reagent for up to 333 transfections in 24-well plates or up to 1333 transfections in 96-well plates
Cat No./ID: 301707
HiPerFect Transfection Reagent (4 x 1 ml)
HiPerFect Transfection Reagent for up to 1332 transfections in 24-well plates or up to 5333 transfections in 96-well plates
Cat No./ID: 301709
HiPerFect Transfection Reagent (100 ml)
HiPerFect Transfection Reagent for transfections in up to 1388 96-well plates

HiPerFect Transfection Reagent适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
使用HiPerFect Reagent高效转染NHEK。
将靶向核纤层蛋白A/C的siRNA或AllStars Negative Control siRNA转染至正常人胚胎角质形成细胞。48小时后,采用real-time RT-PCR检测核纤层蛋白A/C的表达。
1
HiPerFect Reagent能够高效敲除CDC2。
使用QIAGEN的HiPerFect Transfection Reagent或者其他供应商的Reagent L,将不同浓度的靶向CDC2的siRNA转染至HeLa S3细胞内。同时转染靶向绿色荧光蛋白(GFP)的非沉默siRNA。48小时后,采用定量real-time RT-PCR评估CDC2的敲除水平。利用GAPDH的表达量对CDC2的表达进行标准化。其相对于未转染的对照细胞的表达水平如图所示。
2
使用HiPerFect Transfection Reagent进行反向转染。
在反向转染实验方案中,细胞的接种与转染于同一天内进行。将siRNA/miRNA加入孔内,然后加入HiPerFect Reagent。在复合物形成后,将细胞加入孔内。这些转染方案快速便捷,可轻松实现自动化,且常用于高通量实验。
Performance

各种悬浮细胞系以及分化和未分化的巨噬细胞已进行过检测,通过使用HiPerFect Reagent进行siRNA转染检测。许多细胞系可成功转染,并有效敲减靶基因表达(见表1)。使用HiPerFect Reagent转染对于一些需电穿孔转染的细胞类型来说是最佳选择。

表1.使用HiPerFect Reagent成功转染的细胞系
细胞系 细胞类型 siRNA的浓度 敲减
K562 人慢性髓性白血病 5 nM 85%
Jurkat 人T细胞 75 nM 83%
D1.1 人T细胞 50 nM 84%
RAW 264.7 小鼠巨噬细胞 25 nM 77%
J774.A1 小鼠巨噬细胞 50 nM 97%
PMA-differentiated THP-1 人急性单核细胞白血病 5 nM 82%
MEL 鼠红白血病 5-20 nM 50-70%

HiPerFect Reagent不适合转染的细胞系(见表2)。

表2.HiPerFect Reagent不适合转染的细胞系
细胞系 细胞类型
Raji 人B细胞
U937 人巨噬细胞
Molt4 人T细胞
Molt14 人T细胞
HL60 早幼粒细胞系
E6.1 人T细胞

当siRNA的浓度在1–50 nM之间时,可有效敲除(>80%)(参见"HiPerFect Reagent provides effective CDC2 knockdown")。使用1 nM siRNA转染的敲除率为86%,而5 nM siRNA转染的敲除率可达96%。最佳的siRNA使用浓度为1 nM(最少的脱靶效应并有效敲除,参见"Efficient transfection of NHEK")或5 nM(更高的敲除效率)。

Principle

siRNA转染可能发生脱靶效应,即siRNAs影响非同源或部分同源靶基因的表达,但在很大程度上可通过使用低浓度的siRNA避免。使用HiPerFect Transfection Reagent,可高效的转染和沉默基因,在某些情况下可使用10 pM siRNA。使用HiPerFect Transfection Reagent可在很宽的siRNA浓度范围内高效转染siRNA,可使研究者选择他们所需的siRNA浓度。可用于转染多种类型的细胞,包括:HeLa、HeLa S3、HEK 293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC和NHLF。

miRNA研究

micro RNAs(miRNAs)是一类内源性小分子RNA,与siRNAs特点相同。miRNAs在多种生物过程中有重要作用,如生长、分化和调亡。转染合成的miRNA模拟物和抑制剂,是一种用于解释特定miRNAs的靶标和作用的技术。miRNA模拟物是一种化学合成的miRNAs,模拟转染细胞的自然产生的miRNAs。miRNA抑制剂是一种单链修饰RNAs,能够特异性抑制miRNA的功能。转染miRNA模拟物抑制基因的表达,或转染miRNA抑制剂增强基因的表达,由此证明目的miRNA调节该基因的表达。而且,miRNAs在各种信号通路中的作用也可通过检查转染miRNA模拟物或抑制剂后特异性的基因表型来确定。筛查实验也可通过检查转染大分子量miRNA模拟物或混合物后的基因表型来进行。HiPerFect Transfection Reagent用于真核细胞siRNA的高效转染,也可用于miRNA模拟物或抑制剂的低通量或高通量转染。

Procedure

HiPerFect Transfection Reagent是一种即用型溶液,只需将其加入已稀释的siRNA/miRNA溶液、混合、孵育并将混合物转移到细胞即可。转染可在有血清的条件下进行,无需去除细胞中的其他物质。除了HiPerFect Transfection Reagent Handbook中的实验方案,您可以在TransFect Protocol Database中找到适合您的细胞类型和培养瓶/培养皿的实验方案。该数据库提供您所需的确切的实验方案,而不是调整已有的实验方案,节省时间和精力。只需输入细胞类型、核酸和培养瓶的类型即可打印或下载QIAGEN转染实验方案的PDF格式。TransFect Protocol Database是免费的,且无需注册。

 HiPerFect Transfection Reagent转染,可使用常规的转染步骤,在转染前24小时种细胞。同时也提供使用96孔板和384孔板反转染的实验方案(见HiPerFect Transfection Reagent Handbook)。这些实验方案,可在同一天种细胞和进行转染。加入HiPerFect Reagent后,将siRNA/miRNA加入孔中。混合均匀后,将细胞加入孔中(参见"Reverse transfection using HiPerFect Transfection Reagent")。反转染实验方案快速、方便、可实现自动化,通常用于高通量实验。

Applications

即使siRNA浓度较低,HiPerFect Transfection Reagent也能够高效进行siRNA转染,适合多种应用,如:

  • RNA干扰研究
  • miRNA研究
  • 基因表达和功能研究
Features
Specifications
应用 RNAi studies, gene expression studies...
细胞类型 Eukaryotic cells
对照 Not included
特点 Minimized risk of off-target effects, rapid reverse transfection
核酸 siRNA, miRNA
可转染的次数 333 transfections in 24-well plates / 1 ml reagent
技术 Cationic and neutral lipids
转染类型 Transient transfection

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