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Effectene Transfection Reagent

对原代细胞和敏感细胞系的DNA转染

  • 在血清存在的情况下进行高效转染
  • 只需使用少量DNA 即可达到高效转染
  • 高转染效率而且较低的DNA使用量
  • 适合高通量筛选
Effectene Transfection Reagent是一种非脂质体的脂类转染剂,能将DNA转入多种类型的细胞。因其毒性低,非常适合敏感细胞如原代细胞的转染。
Cat No./ID: 301425
Effectene Transfection Reagent (1 ml)
1 ml Effectene Reagent, Enhancer, Buffer; for 40 transfections in 60 mm dishes or 160 transfections in 12-well plates
Cat No./ID: 301427
Effectene Transfection Reagent (4 x 1 ml)
4 x 1 ml Effectene Reagent, Enhancer, Buffer; for 160 transfections in 60 mm dishes or 640 transfections in 12-well plates

Effectene Transfection Reagent适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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使用Effectene Reagent获得高转染效率。
比较使用Effectene Reagent和两种常用的脂质为基础的试剂的转染效率。在优化的条件下,依照供应商试剂的使用指南,鼠畸胎F9细胞(5 x 105)在6孔板中转染荧光素酶报告质粒。转染48小时后,通过测量荧光素酶活性,确定转染效率,使用相对光单位(RLU)。 (数据由法国I. Clavereau, D. Petitprez, and I. Van Seuningen, Unité INSERM 377, Place de Verdun, Lille Cedex提供。)
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血清和DNA量vs.转染效率。
检测血清和DNA量对于使用Effectene Reagent进行转染的影响。转染前一天,将COS-7细胞(每孔2 x 104)接种在96孔板中。在血清存在和不存在的两种条件下,使用0.01–1.0 µg β-半乳糖苷酶报告质粒和0.08–8.0 µl Enhancer(DNA:Enhancer为1:8)和2 μl Effectene Reagent转染细胞。每个柱形代表转染后48小时,4次重复实验的平均转染效率。
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Effectene转染流程。
首先将DNA与Enhancer以及缓冲液(提供理想的盐浓度条件,促进DNA的高效缩合)混合。这一步骤仅需 2–5分钟。然后加入Effectene Reagent,将混合液孵育5–10 分钟,形成Effectene-DNA复合物。将复合物与培养液混合(培养液可含有血清和抗体),然后直接加入细胞中。之后对细胞进行孵育、采集和基因表达分析。
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在原代细胞中有40%的转染效率。
使用Effectene Reagent,在6孔板中,为兔主动脉平滑肌原代细胞转染0.4 µg的绿色荧光蛋白报告基因质粒。转染24小时后,用荧光显微镜观察细胞。通过FACS分析确定,约40%的细胞被转染。(数据由德国Mainz,Dept. Clinical Pharmacology,2nd Medical Clinic,K. Veit提供)。
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使用Effectene Reagent转染寡核苷酸。
C6成胶质细胞瘤细胞(1 x 104)转染FITC-labeled CD44反义寡脱氧核苷酸(ODN)或用Effectene-ODN复合物。转染16小时后,通过免疫荧光分析细胞内转染的ODN的积累和分布。[A]反义寡核苷酸(2 µg)。[B]反义寡核苷酸(0.04 µg)与Effectene Reagent的复合物。转染的反义寡核苷酸在照片中为黄色。(数据由德国汉诺威,汉诺威医学院神经病理学研究所G. Beutel 和M. Schott提供)。
Performance

Effectene Transfection Reagent 的操作流程简单, 转染质粒DNA比用其他的试剂获得的转染效率高(参见"High transfection efficiencies using Effectene Reagent")。Effectene Transfection Reagent适用于带有寡核苷酸的敏感细胞系的转染(参见"Transfection of oligonucleotides using Effectene Reagent")。特别适用于原代细胞(参见"40% transfection efficiency in primary cells")。 使用Effectene Transfection Reagent已成功转染了许多细胞系和原代细胞。有针对不同细胞类型的转染方案。细胞毒性低,因为可在血清存在的情况下使用Effectene Transfection Reagent进行转染且DNA用量低(参见"Serum and DNA quantity vs. transfection efficiency")。

DNA重组技术应用于药物研发领域,导致对高通量转染需求增加。使用Effectene Transfection Reagent进行转染DNA用量低,手动操作少。此外,无需移除转染复合物,使该试剂高度适用于高通量筛选。Effectene Transfection Reagent适用于批量转染。

Principle

Effectene Transfection Reagent是一种全新的非脂质体的脂类转染剂,将DNA 与浓缩增强子和优化的缓冲液混合使用以达到高效转染。浓缩增强子先聚合DNA分子,Effectene Transfection Reagent随后用阳离子脂质包围聚合的DNA分子。采用一种特殊有效的方法将DNA转入真核细胞。这种特性保证了复杂复合物转染的可重现性。

Procedure

Effectene流程分为两步。将DNA与浓缩增强子混合后,加入Effectene Transfection Reagent形成复合物,这一步只需2–5分钟。然后加入Effectene Transfection Reagent,与混合物一起反应5–10分钟以形成Effectene–DNA复合物。复合物与培养基混合(可以含有血清和抗体),直接加入到细胞中。培养细胞至成熟,分析基因表达(参见"Effectene transfection procedure")。

Applications

Effectene Transfection Reagent适用于多种类型细胞的瞬时和稳定转染。

Features
Specifications
应用 RNAi studies, gene expression studies, high-throughput transfections
细胞类型 Eukaryotic cells (primary cells and sensitive cells)
对照 Not included
特点 Non-liposomal lipid formulation, minimal cytotoxicity
核酸 DNA
可转染的次数 160 transfections in 12-well plates / 1 ml reagent
技术 Non-liposomal lipid formulation in conjonction with a DNA-condensing enhancer
转染类型 Transient and stable transfection

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产品介绍与指南 (2)
Brochure detailing reagents for efficient and robust DNA and RNA transfection.
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浏览
试剂盒操作手册 (1)
补充实验方案 (7)
The following protocol is optimized for transient transfection of 293 cells in 96-well plates without pre-plating of cells 24 h prior to transfection. Cell plating and transfection are performed on the same day, making this protocol rapid and convenient.
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The following protocol is optimized for transient transfection of CHO cells in 96-well plates without pre-plating of cells 24 h prior to transfection. Cell plating and transfection are performed on the same day, making this protocol rapid and convenient.
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The following protocol is optimized for transient transfection of COS-7 cells in 96-well plates without pre-plating of cells 24 h prior to transfection. Cell plating and transfection are performed on the same day, making this protocol rapid and convenient.
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