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TopTaq Master Mix Kit

高度可靠的终点法PCR，无可比拟的方便性

  • 易于使用的预混液，操作步骤最少化
  • 冷藏储存节省了解冻时间
  • 可靠的高产率PCR
  • 方便的室温操作
  • 优化的操作程序适合所有PCR实验

TopTaq Master Mix Kit结合了TopTaq DNA Polymerase和即用型预混液的所有优势，简单易用，包含TopTaq DNA Polymerase，将优化需求最小化的TopTaq PCR Buffer和dNTPs。酶保存缓冲液中有独特的TopTaq稳定剂，使得TopTaq Master Mix可保存在4°C，并在室温下进行反应，无需耗时的解冻试剂。所有的成分都含在即用型混合液中，减少了移液步骤，降低了污染的风险。TopTaq Master Mix即使在25°C或4°C下存放很长一段时间，还是可以获得高产率的PCR产物。

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TopTaq Master Mix Kit (250)
For 200 x 50 µl reactions: 2x TopTaq Master Mix containing 250 units of TopTaq DNA Polymerase in total, 10x CoralLoad Concentrate, and RNase-Free Water
 200403
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TopTaq Master Mix Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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PCR反应的产量高，不受储存条件影响。|便利的CoraLoad染料。|TopTaq实验流程。|无需优化，获得高产量PCR产物。|退火时引物结合的特异性增强。|4°C时保持稳定。|
使用TopTaq Master Mix进行PCR，预混液可在–20°C、4°C或25°C条件下保存4个月。使用标准优化流程从人基因组DNA中扩增两个不同的基因（prp, 750 bp和HugL, 1200 bp。结果表明可获得高产量特异性PCR产物。[A]QIAxcel System获得的凝胶图片。Markers: GelPilot 1 kb Plus Marker和QX Alignment Marker 15 bp/10 kb。[B] QIAxcel System一次运行可对至多96个样本进行完全自动化的灵敏、高分辨率的毛细管电泳。|[A] CoralLoad染料包含两种凝胶示踪染料，能够便利的进行凝胶上样，[B] 以及清楚的看到DNA的迁移。|由于酶储存缓冲液中含有的TopTaq Stabilizer具有独特性质，TopTaq DNA Polymerase是第一个可以在4°C下保存的PCR试剂盒。TopTaq Stabilizer结合到TopTaq DNA Polymerase上，阻止聚合酶的失活。在低温下，模板DNA和引物也不能结合到聚合酶上。在变性步骤初期，TopTaq Stabilizer从聚合酶上自由分离，不影响聚合酶活性。这增加了快速构建反应体系的便利性，无需使用冰，节省了融化试剂所需的时间。|[A]按照标准的已优化的实验方案，在相同的循环条件下，使用TopTaq DNA Polymerase扩增哺乳动物基因组DNA的14个PCR产物，片段大小在100 bp至2 kb之间。[B]使用其他供应商的DNA聚合酶扩增同样的4个靶序列（11–14泳道），循环条件相同。对于不同的片段大小，TopTaq DNA Polymerase (QIAGEN) 的特异性PCR产物均有更高产量。|QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K+结合到DNA主链上的磷酸基团（P–）上，稳定结合到模板上的引物。在热循环中，NH4+以铵离子和氨的形式存在，可以与碱基（B）之间的氢键发生相互作用，使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用，在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。|[A] TopTaq DNA Polymerase在聚合酶的表面有小分子量的TopTaq Stabilizer，因此可在4°C或室温下保持稳定。[B]更高温度下，TopTaq Stabilizer与聚合酶分离开，不影响酶活性。|
性能
TopTaq Master Mix Kit用于标准的和特有的终点式PCR应用，无需优化。TopTaq Master Mix即使在25°C或4°C下保存4个月还是可以获得高产率的PCR产物，说明TopTaq Master Mix能够提供非常稳定和可靠的扩增体系（参见"Reliable high-yield PCR"）。TopTaq稳定剂与TopTaq DNA Polymerase结合，防止聚合酶在长期储存过程中灭活。预混液中含有独特的PCR，具有均衡的钾和铵离子，改进特异性引物-模板的退火条件，并同时降低非特异性退火条件。TopTaq DNA Polymerase比其他供应商测试的DNA聚合酶具有更好的性能，确保了即使在使用较低的模板量，也可获得高产量的特异性产物和单独的片段大小（参见"High PCR product yields without optimization”）。
原理

由TopTaq Master Mix Kit研发用于提供前所未有的应用便捷性和高度可靠的终点式PCR。在研发TopTaq PCR体系之前，所有PCR酶都需要在–20°C下储存。因为在酶保存缓冲液中含有独特的专有TopTaq稳定剂，TopTaq Master Mix Kit是首款可在4°C下储存的试剂盒。该即用型预混液规格提供了更大的便利。由于TopTaq DNA Polymerase的使用，甚至在扩增不同大小的片段时，也可获得高产量的特异性产物。（参见"High PCR product yields without optimization"）。

TopTaq PCR Buffer

新型的TopTaq PCR Buffer有助于扩增特异性PCR产物。在每个PCR循环的退火步骤中，相对非特异性引物结合，该缓冲液大大增加了特异性引物结合的比率。由于KCl和(NH4)2SO4独特均衡的结合，相比传统的PCR缓冲液，该PCR缓冲液提供了更广泛的温度和Mg2+浓度，以及严格的引物-退火条件（参见"Increased specificity of primer annealing"）。通过调节退火温度或Mg2+浓度可显著减少优化PCR反应的需求，有时不需要优化过程。

TopTaq稳定剂

TopTaq与TopTaq DNA Polymerase结合，防止在长期储存过程中聚合酶灭活（参见"Stabilization at 4°C"），同时防止模板DNA和引物在低温下与聚合酶结合。在初始的降解步骤中，TopTaq稳定剂能从聚合酶中分离而不影响聚合酶的活性。

CoralLoad Concentrate

为了更方便使用，成套提供TopTaq Master Mix Kit和CoralLoad Concentrate。CoralLoad Concentrate包含两种胶示踪染料。该独特的试剂提高了移液可视化，有助于去除DNA迁移距离并优化琼脂糖凝胶跑样时间。使用CoralLoad Concentrate时，可将PCR产物直接上样到琼脂糖凝胶上而不需要事先另外加缓冲液（参见"Convenient CoralLoad Concentrate"）。

操作流程
TopTaq Master Mix Kit结合了独特的TopTaq DNA Polymerase和即用型预混液的所有优势。由于TopTaq Master Mix Kit，无需单独的移液部分组件，并能最大限度地减少污染风险和移液可视化，使PCR反应体系构建快速简单。在初始的降解步骤中，TopTaq稳定剂能从聚合酶中分离而不影响聚合酶活性。这增加了便利，并能即可进行反映设置，无需冰上工作，节省了解冻试剂所需的时间（参见"TopTaq procedure"）。
可靠的高产量PCR，无需优化过程

经优化的实验方案适用于所有PCR检测，去除了个别引物-模板体系中漫长的实验参数优化需要，能节省大量的时间和成本。TopTaq Master Mix即使在25°C或4°C下保存4个月还是可以获得高产率特异性PCR产物（参见"Reliable high-yield PCR"）。

应用

TopTaq Master Mix Kit高度适用于所有终点法PCR应用。

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特点
参数
应用 PCR, RT-PCR, DNA Fingerprinting
包括dNTPs Yes (in Master Mix)
酶活 5' -> 3' exonuclease activity
预混液 Yes
反应类型 PCR amplification
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Genomic DNA and cDNA
单一或多重 Single
储存条件 Fridge storage and room temperature setup
有/无热启动酶 Without Hotstart

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试剂盒操作手册
1
TopTaq PCR Handbook - (EN)
For standard and specialized end-point PCR applications without the need for optimization
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安全数据表
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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Reliable high-yield PCR independent of storage conditions
PCR反应的产量高，不受储存条件影响。
使用TopTaq Master Mix进行PCR，预混液可在–20°C、4°C或25°C条件下保存4个月。使用标准优化流程从人基因组DNA中扩增两个不同的基因（prp, 750 bp和HugL, 1200 bp。结果表明可获得高产量特异性PCR产物。[A]QIAxcel System获得的凝胶图片。Markers: GelPilot 1 kb Plus Marker和QX Alignment Marker 15 bp/10 kb。[B] QIAxcel System一次运行可对至多96个样本进行完全自动化的灵敏、高分辨率的毛细管电泳。
Ready-to-load PCR buffer
便利的CoraLoad染料。
[A] CoralLoad染料包含两种凝胶示踪染料，能够便利的进行凝胶上样，[B] 以及清楚的看到DNA的迁移。
TopTaq Procedure
TopTaq实验流程。
由于酶储存缓冲液中含有的TopTaq Stabilizer具有独特性质，TopTaq DNA Polymerase是第一个可以在4°C下保存的PCR试剂盒。TopTaq Stabilizer结合到TopTaq DNA Polymerase上，阻止聚合酶的失活。在低温下，模板DNA和引物也不能结合到聚合酶上。在变性步骤初期，TopTaq Stabilizer从聚合酶上自由分离，不影响聚合酶活性。这增加了快速构建反应体系的便利性，无需使用冰，节省了融化试剂所需的时间。
High PCR product yields without optimization
无需优化，获得高产量PCR产物。
[A]按照标准的已优化的实验方案，在相同的循环条件下，使用TopTaq DNA Polymerase扩增哺乳动物基因组DNA的14个PCR产物，片段大小在100 bp至2 kb之间。[B]使用其他供应商的DNA聚合酶扩增同样的4个靶序列（11–14泳道），循环条件相同。对于不同的片段大小，TopTaq DNA Polymerase (QIAGEN) 的特异性PCR产物均有更高产量。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
退火时引物结合的特异性增强。
QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K+结合到DNA主链上的磷酸基团（P–）上，稳定结合到模板上的引物。在热循环中，NH4+以铵离子和氨的形式存在，可以与碱基（B）之间的氢键发生相互作用，使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用，在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。
Stabilization of TopTaq DNA Polymerase at 4°C
4°C时保持稳定。
[A] TopTaq DNA Polymerase在聚合酶的表面有小分子量的TopTaq Stabilizer，因此可在4°C或室温下保持稳定。[B]更高温度下，TopTaq Stabilizer与聚合酶分离开，不影响酶活性。