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Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit

用于在Rotor-Gene PCR仪上超快速的多重一步法qRT-PCR基因表达分析
  • 在Rotor-Gene PCR仪上获得超快速、可靠的结果
  • 单管内高灵敏检测多个RNA靶序列
  • 表现优越的多重PCR，无需优化
  • 低丰度和高丰度靶基因高效共扩增

Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit 专用于Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪和其他Rotor-Gene PCR仪，可超快速进行基于序列特异性探针的可靠的多重一步法real-time RT-PCR定量分析。通过调整PCR仪，可在单管内同步定量分析多至4个RNA靶基因（如1个参照和3个靶基因）。配合经优化的预混液和具有独特转子设计的Rotor-Gene PCR仪共同使用，表现卓越。为便于使用，预混液应储存在2–8°C。

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Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Master Mix, 100 µl Rotor-Gene RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
 204974
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Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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可靠的多重分析。|Fast primer annealing.|QIAGEN multiplex kits.|独特的PCR缓冲液。|高效、灵敏的多重分析。|高效的四重分析。|
采用双重一步法real-time RT-PCR，配合Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit和自行设计的TaqMan探针检测28S rRNA（Cyanine 670荧光染料；内置数据）和PPIA（亲环素A，FAM荧光染料）。白细胞RNA作为模板（10倍稀释，从100 ng到10 pg）在Rotor-Gene 3000上反应，重复三次反应。双重反应（彩色的）的扩增曲线与那些在不同反应管中反应的扩增曲线（黑白的）重叠，表明该双重分析的可靠性。|[A] Q-Bond in Rotor-Gene Multiplex PCR Master Mix increases the affinity of DNA polymerase for short single-stranded DNA, reducing primer annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing primer annealing time.|Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kits provide a simple procedure for quantitative, multiplex, real-time PCR. In contrast to current methods, the kits eliminate the need for optimization of the concentrations of primers, Mg2+, and Taq DNA polymerase, even for difficult assays (e.g., assays in which the copy number of the target gene is much smaller than that for the reference gene).|[A] NH4+防止引物与模板的非特异性结合。[B]MP合成因子是创新的PCR添加剂，能够提高模板处局部的引物浓度，与K+和其他离子一起，MP合成因子能够特异性稳定结合的引物，使HotStarTaq Plus DNA Polymerase作用下的引物延伸更加高效。|使用[A] HSP90AA1（109、107、105、103或10个拷贝）和[B] GAPDH（109个拷贝）的体外转录产物进行双重一步法real-time RT-PCR（彩色曲线）。在不同反应管中的RT-PCR作为对照（黑白曲线）。双重反应使用Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit和自行设计的TaqMan探针在Rotor-Gene 6000上进行。HSP90AA1曲线间隔的一致性和重叠的GAPDH表明了双重RT-PCR的可靠性。[C] HSP90AA1的扩增效率在理想范围内。|所示靶基因使用Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit和自行设计的TaqMan探针进行4重一步法real-time RT-PCR。反应在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR 仪上使用HeLa细胞的100、10、1或0.1 ng RNA进行。CT值与对数后的模板量平行，表明4个靶基因有相同的扩增效率。GAPDH: 甘油醛-3-磷酸脱氢酶；RPS27A: 核糖体蛋白S27a；NFKB: B细胞中的核因子K轻链基因启动子。|
性能
Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit能够对低至高丰度靶基因可靠进行二重、三重、四重定量检测，可检测低至10 pg的模板及10个拷贝的靶基因（参见"Reliable duplex analysis"和"Efficient, sensitive duplex analysis"）。多重分析中不同的靶基因以同样的高效率得以扩增（参见"Highly efficient 4-plex analysis"）。因此可实现可靠的相对定量检测，标准品为对照基因。
原理

在同一反应管中扩增参照和靶基因，减少了手动操作失误，提高了基因定量检测的可靠性。Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit能够在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上可靠的多重定量检测RNA靶基因，无需优化反应条件（参见"QIAGEN multiplex kits"）。进行一步法real-time RT-PCR，使逆转录和PCR扩增在同一反应容器中相继进行。因为无需将逆转录产物转移到另一管中进行PCR，所以real-time RT-PCR的流程得以简化，可实现高通量分析。 

平衡的K+和NH4+离子组合确保高度特异性，促进特异性引物退火，PCR特异性高、灵敏度好。一种新颖的PCR添加剂合成的Factor MP专用于多重PCR应用，能够以同样的效率扩增在同一反应中不同的扩增子（参见"Unique PCR buffer"）。

一种新颖的PCR添加剂Q-Bond可缩短扩增时间，确保快速扩增的同时不影响表现（参见"Fast primer annealing"）。此外，逆转录酶在15分钟内即可高效的合成cDNA，而高度严谨的热启动酶HotStarTaq Plus DNA Polymerase在95ºC条件下只需5分钟即可快速激活。

2x Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit组分*
组分 特点 优势
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95ºC条件下5分钟激活 室温下建立qPCR反应体系
Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Buffer 浓度平衡的NH4+和K+离子 特异性引物退火，确保可靠的qPCR结果
合成的Factor MP 在同一反应管中可靠的进行多达4个基因的多重分析
独特的Q-Bond添加剂 更快速的PCR循环，快速获得结果，一天可进行更多的反应
Rotor-Gene RT Mix   RNA亲和性高的逆转录酶 RNA逆转录可在15分钟内完成，甚至包括复杂的二级结构
* 都含有dNTP混合液（dATP, dCTP, dGTP, dTTP）。
操作流程

应用即用型预混液无需优化反应和循环条件。只需在预混液中添加模板RNA和引物探针对、逆转录酶，然后设置PCR仪即可开始实验。试剂盒中提供的操作手册中列出了推荐染料，并为多重RT-PCR分析提供了单独的实验方案。

应用
Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit专用于Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪，使用序列特异性探针进行快速的一步法RT-PCR分析。该试剂盒也与Rotor-Gene 3000和Rotor-Gene 6000兼容。多达4个cDNA靶基因可在单管内同步快速定量分析，提高通量的同时，节约珍贵的样本。

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特点
参数
应用 Real-time quantification of RNA targets in a multiplex format
反应类型 Real-time one-step RT-PCR
real-time或终点法PCR Real-time
样本/目标类型 RNA
单一或多重 Multiplex
SYBR Green I或序列特异性探针 Sequence-specific probes
热循环仪 Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000
有/无ROX Without ROX dye

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产品介绍与指南
1
(EN) - Rotor-Gene Q - Pure Detection
Now with even more applications!
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试剂盒操作手册
1
(EN) - Rotor-Gene Multiplex Handbook
For fast multiplex real-time PCR, two-step RT-PCR, and one-step RT-PCR using sequence-specific probes on Rotor-Gene cyclers
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安全数据表
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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Reliable duplex analysis of a control and target gene.
可靠的多重分析。
采用双重一步法real-time RT-PCR，配合Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit和自行设计的TaqMan探针检测28S rRNA（Cyanine 670荧光染料；内置数据）和PPIA（亲环素A，FAM荧光染料）。白细胞RNA作为模板（10倍稀释，从100 ng到10 pg）在Rotor-Gene 3000上反应，重复三次反应。双重反应（彩色的）的扩增曲线与那些在不同反应管中反应的扩增曲线（黑白的）重叠，表明该双重分析的可靠性。
Fast primer annealing with Q-Bond
Fast primer annealing.
[A] Q-Bond in Rotor-Gene Multiplex PCR Master Mix increases the affinity of DNA polymerase for short single-stranded DNA, reducing primer annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing primer annealing time.
Successful Multiplex PCR-Based Genotypic Analysis without the Need for Optimization
QIAGEN multiplex kits.
Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kits provide a simple procedure for quantitative, multiplex, real-time PCR. In contrast to current methods, the kits eliminate the need for optimization of the concentrations of primers, Mg2+, and Taq DNA polymerase, even for difficult assays (e.g., assays in which the copy number of the target gene is much smaller than that for the reference gene).
Unique Type-it Microsatellite PCR Buffer Promotes Stable and Efficient Annealing
独特的PCR缓冲液。
[A] NH4+防止引物与模板的非特异性结合。[B]MP合成因子是创新的PCR添加剂，能够提高模板处局部的引物浓度，与K+和其他离子一起，MP合成因子能够特异性稳定结合的引物，使HotStarTaq Plus DNA Polymerase作用下的引物延伸更加高效。
Efficient, sensitive duplex analysis of targets varying greatly in abundance.
高效、灵敏的多重分析。
使用[A] HSP90AA1（109、107、105、103或10个拷贝）和[B] GAPDH（109个拷贝）的体外转录产物进行双重一步法real-time RT-PCR（彩色曲线）。在不同反应管中的RT-PCR作为对照（黑白曲线）。双重反应使用Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit和自行设计的TaqMan探针在Rotor-Gene 6000上进行。HSP90AA1曲线间隔的一致性和重叠的GAPDH表明了双重RT-PCR的可靠性。[C] HSP90AA1的扩增效率在理想范围内。
Highly efficient 4-plex analysis.
高效的四重分析。
所示靶基因使用Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit和自行设计的TaqMan探针进行4重一步法real-time RT-PCR。反应在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR 仪上使用HeLa细胞的100、10、1或0.1 ng RNA进行。CT值与对数后的模板量平行，表明4个靶基因有相同的扩增效率。GAPDH: 甘油醛-3-磷酸脱氢酶；RPS27A: 核糖体蛋白S27a；NFKB: B细胞中的核因子K轻链基因启动子。