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QuantiTect SYBR® Green PCR Kits

使用SYBR Green I进行两步法RT-PCR,用于基因表达分析

  • 整合热启动,PCR特异性高
  • 可靠定量检测低丰度转录本
  • 准确定量检测各种起始量样本
  • 提供含有或不含尿嘧啶DNA糖基化酶(UNG)两种包装
  • 无需优化反应和循环条件

QuantiTect SYBR Green PCR Kit使用SYBR Green I通过两步法real-time RT-PCR对cDNA目标序列进行高特异性的定量检测。热启动和独特的实时定量PCR缓冲液确保了对cDNA目标序列高特异性和灵敏度的real-time定量检测。dNTP混合液含有dUTP,可选择性进行UNG处理。为便于使用,预混液可储存在2–8°C。

Cat No./ID: 204141
QuantiTect SYBR Green PCR Kit (40)
Trial kit for 40 x 50 µl reactions: 1 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204143
QuantiTect SYBR Green PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204145
QuantiTect SYBR Green PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 20 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204163
QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 100 µl UNG Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water

QuantiTect SYBR® Green PCR Kits适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


2
在ABI PRISM 7700上实现高度灵敏的定量检测。
在ABI PRISM 7700上扩增1 x 106至5个拷贝的含有人CFTR基因片段的质粒模板(背景为不含CFTR基因的50 ng玉米基因组DNA)。CFTR(囊性纤维化跨膜传导调节因子)是cAMP调控的氯离子通道。NTC:无模板对照。
3
特异性定量检测。
在Rotor-Gene 3000上使用针对人BAX的QuantiTect Primer Assay和指定的试剂盒分析稀释的人白细胞cDNA。熔解曲线分析中出现单峰,NTC反应呈平直曲线,说明使用QuantiTect Kit和Assay可实现高特异性定量。NTC:无模板对照。Norm. Fluoro.:标准化的荧光。
4
特异性的灵敏检测。
在Applied Biosystems 7500上使用针对人IL8的QuantiTect Primer Assay和指定的试剂盒,分析稀释的人白细胞cDNA。熔解曲线分析中出现单峰,NTC反应呈平直曲线,说明只有使用QuantiTect Kit和Assay的组合才可实现高特异性定量。NTC:无模板对照。
5
高度特异性的real-time PCR。
使用 [A] QuantiTect SYBR® Green PCR +UNG Kit或 [B] Supplier R的试剂盒和UNG进行UNG预处理的基于SYBR® Green的real-time PCR。在LightCycler 480上使用10倍稀释的人白细胞cDNA(100 ng至100 pg)和针对Myc(一种原癌基因)的QuantiTect Primer Assay运行两次重复反应。熔解曲线分析(参见插图)显示,使用QuantiTect Kit可获得较Supplier R的试剂盒更高的PCR特异性。
Performance

QuantiTect SYBR Green PCR Kit在宽泛的范围内符合线性规律,可实现特异性定量检测(参见"Specific quantification over a wide linear range")。与其他聚合酶相比,HotStarTaq DNA Polymerase具有严格的热启动,进一步提高了PCR反应的特异性。独特的PCR缓冲液和HotStarTaq DNA Polymerase,确保低丰度转录本的定量检测,低至5个拷贝的目标序列也可被准确检测(参见"Highly specific amplification")。QuantiTect SYBR Green PCR Kit与QuantiTect Reverse Transcription Kit和QuantiTect Primer Assays配合使用,可获得灵敏、可靠的结果(参见"Specific and sensitive quantification")。

QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit中经特别优化的UNG溶液配合经验证的PCR预混液可有效避免PCR产物中的残留污染,并对靶序列进行可靠的定量检测(参见"High specificity in real-time PCR")。

Principle

QuantiTect SYBR Green PCR Kit含有优化的即用型预混液,可使用SYBR Green I对cDNA靶序列进行高特异性和灵敏度的real-time定量分析。预混液中的荧光染料SYBR Green I可对很多不同的靶序列进行分析,无需合成靶标特异性标记引物。独特的PCR缓冲液含有K+和NH4+,能促使特异性引物退火,获得高PCR特异性和灵敏度(参见"Specific primer annealing")。此外,HotStarTaq DNA Polymerase具有严格的热启动,可防止非特异性产物的形成。

QuantiTect SYBR Green PCR预混液含有dUTP,可在PCR前使用尿嘧啶DNA糖基化酶 (UNG)预处理,保证之前反应残留的PCR产物会影响后续的PCR反应。

2x QuantiTect SYBR Green PCR Kit的组份
组份 特点 优势
HotStarTaq DNA Polymerase 95ºC孵育15分钟即可活化 室温下即可构建qPCR反应体系
QuantiTect SYBR Green PCR Buffer NH4+和K+的平衡组合 特异性引物退火确保PCR结果可靠
dNTP mix 含有dUTP,会部分替代dTTP,可进行UNG处理 可选择进行UNG处理,以消除之前反应残留的PCR产物
SYBR Green I dye DNA双链结合时,生成强烈的荧光信号 高度灵敏的定量检测
ROX dye 在Applied Biosystems或Agilent的PCR仪上进行荧光信号校准 可在需要ROX染料的PCR仪上进行准确的定量检测。不会干扰其他real-time PCR仪
Procedure

QuantiTect SYBR Green PCR Kit无需进行繁琐耗时的反应条件优化。只需简单地将引物、探针和cDNA模板加入到即用型PCR预混液中,即可开始反应(参见"Two-step RT-PCR")。使用操作手册中的实验方案可在任何real-time PCR仪上得到快速、可靠的结果。如果需要,反应液可用尿嘧啶DNA糖基化酶(UNG)预处理,以去除之前反应残留的PCR产物。

为在两步法real-time RT-PCR中获得理想结果,我们推荐使用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。此试剂盒可在20分钟内快速合成cDNA,并可去除基因组DNA污染。

QuantiTect SYBR Green PCR Kit配合QuantiTect Primer Assays可在基因表达分析中获得高度特异性的结果。基因组范围、生物信息学验证的引物对覆盖所有人类、小鼠、大鼠和其他各类生物基因。QuantiTect Primer Assays可在GeneGlobe网站上方便地订购。

Applications

QuantiTect SYBR Green PCR Kit可用在各种real-time PCR仪上对cDNA目标序列进行基因表达分析,包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的仪器。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上使用时,我们推荐专门为快速PCR研发的Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit。

Features
Specifications
应用 Real-time quantification of genomic DNA or cDNA targets
反应类型 Real-time PCR and two-step RT-PCR
real-time或终点法PCR Real-time
样本/目标类型 DNA, cDNA
单一或多重 Single
SYBR Green I或序列特异性探针 SYBR Green I
热循环仪 All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
有/无ROX With ROX

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