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QuantiNova Reverse Transcription Kit

用于快速的cDNA合成和高度可重复性的两步法RT-PCR
  • gDNA Removal Mix可消除gDNA带来的误差
  • 内质控可指示cDNA合成的质量
  • 高亲和性逆转录酶可实现宽线性范围的cDNA合成
独特的QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了含有基因组DNA去除方案和内质控的一种快速便捷的cDNA合成方法。gDNA Removal Mix可有效去除RNA样本中的基因组DNA污染,同时内质控RNA可以监测逆转录和扩增反应是否成功。QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了快速高效逆转录反应所需的一切。合成的cDNA适用于进行real-time PCR, 可以对任何mRNA区域的靶向序列进行可靠定量。
Cat No./ID: 205410
QuantiNova Reverse Transcription Kit (10)
For 10 x 20 µl reactions: 20 µl 8x gDNA Removal Mix, 10 µl Reverse Transcription Enzyme, 40 µl Reverse Transcription Mix (containing RT primers), 20 µl Internal Control RNA, 1.9 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 205411
QuantiNova Reverse Transcription Kit (50)
For 50 x 20 µl reactions: 100 µl 8x gDNA Removal Mix, 50 µl Reverse Transcription Enzyme, 200 µl Reverse Transcription Mix (containing RT primers), 100 µl Internal Control RNA, 1.9 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 205413
QuantiNova Reverse Transcription Kit (200)
For 200 x 20 µl reactions: 4 x 100 µl 8x gDNA Removal Mix, 4 x 50 µl Reverse Transcription Enzyme, 4 x 200 µl Reverse Transcription Mix (containing RT primers), 4 x 100 µl Internal Control RNA, 4 x 1.9 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 205813
QuantiNova IC Probe Assay (200)
400 µl primer / probe mix (10x) for 200 reactions, detects Internal Control RNA; use with QuantiNova Probe PCR Kit or QuantiNova Probe RT-PCR Kit
Cat No./ID: QT02589307
QuantiNova IC SYBR Green Assay
QuantiTect Primer Assay for SYBR-based detection of QuantiNova Internal Control RNA; available via GeneGlobe (sufficient for approx. 500 x 20 µl rxn). For use with QuantiNova SYBR Green PCR Kit or QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit

QuantiNova Reverse Transcription Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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有效去除gDNA污染保证对于转录本的精确定量。

在去除或不去除gDNA的情况下两步法Real-time RT-PCR分析ACTB基因。从人类全血样本中纯化了基因组DNA而非RNA作为模板。在使用QuantiNova Reverse Transcription Kit进行的cDNA合成反应中加入不同量的gDNA (100 ng, 10 ng, 1 ng)。使用QuantiNova Probe PCR Kit在一台Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR 仪上进行real-time PCR,设置三个复孔,cDNA稀释比为1:10。如不进行gDNA去除,gDNA污染会产生很强的信号。如进行gDNA去除步骤,上述污染信号可被成功消除(N.D. =未检测到)。

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内质控可靠检测是否存在抑制剂。

两步法Real-time RT-PCR分析多个目的基因和QuantiNova Internal Control RNA (QN IC RNA)。向RT反应中加入从人类全血样本中纯化的1微克总RNA和QN IC RNA。同时检测带有RNA抑制剂(0.003%十二烷基硫酸钠)和不带抑制剂的RNA样本。使用QuantiNova SYBR Green PCR Kit在一台Bio-Rad CFX384 PCR仪上进行real-time PCR,并设置了三个复孔,cDNA稀释比1:100。结果显示内质控和内源目的转录本的Cq变异值相当,证明IC RNA可以被用来检测抑制剂的存在与否。

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5 µg–10 pg 起始RNA的精确定量。

两步法Real-time RT-PCR分析RPS27A基因。先从人类全血样本中纯化出总RNA,然后使用QuantiNova Reverse Transcription Kit对于梯度稀释的RNA(5 µg – 10 pg)进行逆转录反应以合成cDNA。使用QuantiNova Probe PCR Kit在Bio-Rad CFX384PCR仪上进行Real-time PCR,并设置了三个复孔,cDNA稀释比1:100。扩增曲线显示cDNA合成的动力学范围极宽,覆盖了全部检测范围(5 µg – 10 pg总RNA)。

Performance
独特的gDNA Removal Mix可迅速有效去除RNA样本中的基因组DNA污染。去除基因组DNA污染对于获得精确基因表达结果非常关键,并且在不能设计出RNA特异性的引物时,例如当分析单外显子基因时,也需要去除基因组DNA污染。使用gDNA Removal Buffer可以节省时间和成本,因为不需要在反应中或反应后单独进行DNase消化。

全新开发的内质控是一种成分明确的转录本(RNA分子),可直接加入您的样本并同时被逆转录为cDNA,可直接反应仪器或相应试剂是否正常,实验构建的体系是否存在错误,以及反应体系中是否存在抑制剂。预期的Cq (CT)范围可以用来确认逆转录和PCR扩增的成功与否,以及实验结果的可重复性。

QuantiNova Reverse Transcriptase的高RNA亲和性确保您可从任何RNA模板获得高产率cDNA。即便是难扩增模板,如高GC含量或含有复杂二级结构的模板,也可被成功进行逆转录反应。Reverse Transcription Mix包含一种特别优化的oligo-dT和随机引物混合物,可以从包括5’区域在内的RNA转录本的任何位置进行cDNA合成。无论扩增靶标位于转录本的哪个位置,该试剂盒均能提供可供real-time PCR分析使用的高产量cDNA。同时对于低表达丰度的基因, 该试剂盒还可提供更高灵敏度的检测能力。

QuantiNova Reverse Transcription Kit可在较宽的起始量范围内提供精确的结果,在标准的实验方案中起始RNA量可最高达5 µg,在特殊要求的实验条件下该用量可以加倍。
Principle
QuantiNova Reverse Transcriptase具有高RNA亲和性,可以在极宽的模板量范围内(10 pg– 5 μg)合成cDNA(见图:5 µg–10 pg起始 RNA的精确定量)。无论扩增靶标位于转录本的哪个位置,该试剂盒可提供用于real-time PCR分析的高产量cDNA。即使难扩增模板,比如高GC含量或含有复杂二级结构的模板,也可被成功进行逆转录反应。QuantiNova RT Buffer经过优化,可兼容real-time PCR缓冲液。

为获得精确的real-time RT-PCR基因表达检测结果,非常重要的一点是保证只有cDNA被扩增和检测到。gDNA Removal Mix可迅速有效的去除基因组DNA干扰(见图:有效去除gDNA污染保证准确定量转录本)。使用gDNA Removal Mix节省了时间和成本,因为不需要在反应中或反应后单独进行DNase消化。同时,也无需设计RNA特异性引物或探针。

检测cDNA合成的差异度可以显示实验结果的可重复性。全新开发的内质控是一种成分明确的转录本(RNA分子),可直接加入您的样本并同时被逆转录为cDNA,可直接反应仪器或相应试剂是否正常,实验构建的体系是否存在错误,以及反应体系中是否存在抑制剂。因为内质控和真实转录本的性质相似,所以它可以在接下来的qPCR实验中用来确认逆转录和PCR扩增的成功与否(见图:内质控可靠检测是否存在抑制剂)。
 
QuantiNova Reverse Transcription Kit成分
成分 优势
gDNA Removal Mix 确保在real-time RT-PCR中只检测RNA
Internal Control RNA 确认RT-PCR成功与否
QuantiNova Reverse Transcriptase RNA模板量范围极宽(10 pg – 5 μg RNA)
高灵敏度
QuantiNova RT buffer system 逆转录难扩增模板
RT Primer Mix 从转录本任意区域合成cDNA,包括从5’区

Procedure
使用QuantiNova Reverse Transcription Kit进行基因组DNA去除和cDNA合成仅需20分钟。该试剂盒包含进行快速cDNA合成的所需的一切成分。

纯化后的RNA和gDNA Removal Mix简单孵育即可除去基因组DNA污染。和其它方法不同的是,RNA样本接下来可直接与Reverse Transcription Mix和Reverse Transcription Enzyme的预混液混合,进行逆转录反应。使用QuantiNova Reverse Transcriptase,逆转录反应可以在低温下进行,包括对于复杂的二级结构模板。反应在42°C的温度条件下进行保证了RNA的完整性,并随后在85°C进行酶灭活以终止反应。不需要进行额外的RNA变性或RNase H降解。

Applications
QuantiNova Reverse Transcription Kit可从任何起始材料(包括激光微切割样本或组织活检样本)获得高效及高灵敏度real-time RT-PCR结果。