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QuantiNova Probe PCR Kit

用于基于探针技术的real-time PCR,具有高度灵敏、特异性、超快速的特性
  • 准确检测少量靶基因,甚至可检测1个拷贝的靶基因
  • 每次反应可检测多个靶基因
  • 在30°C下可保持稳定达100小时,适用于多种灵活的工作流程
  • 便利的观察移液,减少移液失误
  • 具有高度特异性,可获得更出色结果
  • 超快速的反应时间可实现更高处理通量
QuantiNova Probe PCR Kit可避免在较低温度时反应出现错配。该试剂盒采用抗体介导的新型热启动技术,提高了基于探针的real-time PCR反应的特异性和反应效率,可在多种real-time PCR仪上对cDNA或gDNA进行单重或双重分析,获得准确结果。该试剂盒的反应液可在室温下保持稳定长达100小时,无需加入冷却剂;因此是处理高通量样本和自动化工作流程的理想选择。试剂盒自带移液追踪体系,便于观察移液是否正确,让您无后顾之忧。其具有高度灵敏性,能够检测少量的靶基因,确保每次qPCR都获得可靠的反应结果。
Cat No./ID: 208252
QuantiNova Probe PCR Kit (100)
For 100 x 20 µl reactions: 1 ml 2x QuantiNova Probe PCR Master Mix , 250 µl QN ROX Reference Dye, 500 µl QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer, 1.9 ml Water
Cat No./ID: 208254
QuantiNova Probe PCR Kit (500)
For 500 x 20 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiNova Probe PCR Master Mix, 1 ml QN ROX Reference Dye, 500 µl QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer, 1.9 ml Water
Cat No./ID: 208256
QuantiNova Probe PCR Kit (2500)
For 2500 x 20 µl reactions: 15 x 1.7 ml 2x QuantiNova Probe PCR Master Mix, 5 x 1 ml QN ROX Reference Dye, 5 x 500 µl QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer, 5 x 1.9 ml Water

QuantiNova Probe PCR Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
灵敏检测单一拷贝。
[A]使用QuantiNova Probe PCR Kit检测白细胞基因组DNA(30、3、0.3和0.03 ng的gDNA,相当于104到10个拷贝)中的单拷贝基因CFTR。结果表示在散点图中,为标准曲线。 依据拷贝数与CT值绘制的散点图呈高度线性。将可用于60次反应的预混液用于反应体系构建,在每个反应中加入3 pg gDNA模板,理论上相当于每孔1个拷贝。使用标准曲线测算60个反应中的拷贝数。将如此得到的拷贝数与计算的泊松分布相比较。[B]使用标准曲线定量的单拷贝检测结果与泊松分布具有高度一致性,表明反应具有高度灵敏性。
1
在多种real-time PCR仪上均能获得出色结果。
分析HeLa细胞中的EGFR基因表达。使用QuantiTect Reverse Transcription Kit对RNA进行逆转录。使用10倍稀释的cDNA(从10 ng至 0.01 ng)在多种PCR仪上进行三次重复反应。QuantiNova Probe PCR Kit在多种PCR仪上和多种反应条件下都表现出稳定的灵敏性、可重复性和高效性。
2
困难模板的扩增。
[A]在Bio-Rad CFX Connect PCR仪上,将QuantiNova Probe PCR Kit与供应商B的探针法PCR试剂盒相比较,[B]在ViiA7 PCR仪上与供应商L的探针法PCR试剂盒相比较。使用10倍梯度稀释的质粒DNA(每次反应中拷贝数为106–102个)和TaqMan探针进行反应,重复三次。QuantiNova Probe PCR Kit获得的CT值明显较低,且反应效率高于其他两家的试剂盒。
3
双重PCR反应的结果与单重PCR反应结果相当。
在Bio-Rad CFX96 PCR仪上使用GAPD和TNF的TaqMan Assays与QuantiNova Probe PCR Kit,进行双重和单重PCR反应。使用白细胞DNA的10倍稀释液(从100 ng至10 ng)作为模板,反应重复三次。[A]TNF的单重反应和双重反应扩增曲线重叠,[B]GAPD的单重反应和双重反应扩增曲线重叠。散点图表明使用QuantiNova Probe PCR Kit进行单重或双重扩增均能获得可靠结果。
4
QuantiNova新型热启动机制的原理。
在QuantiNova Antibody和QuantiNova Guard的作用下,QuantiNova DNA Polymerase为失活状态,直至热启动步骤时会被激活。
5
试剂盒中的染料可用于观察移液。
QuantiNova Probe PCR Master Mix含有蓝色惰性染料,加入稀释在QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer中的核酸模板后,反应液会变色为绿色,有助于正确的移液操作。
Performance
带有惰性染料,便于观察移液
QuantiNova Probe PCR Kit中的预混液含有蓝色惰性染料,不会干扰real-time PCR,但是使反应液在管中或孔板中便于观察。QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer含有黄色惰性染料。当稀释在QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer中的模板核酸被加入预混液时,溶液颜色由蓝色变为绿色(参见"Built-in pipetting control"),便于观察移液和反应体系构建是否正确。

反应液可稳定储存达100小时
real-time PCR混合液可在30°C储存长达100小时,不会影响后续反应表现(表1)。凭借其出色的稳定性,即使长时间在室温储存,也无需加入冷却剂,QuantiNova Probe PCR Kit是高通量反应的理想选择(参见下表)。

表1. 反应液的储存时间对反应稳定性的影响
 
                                                                                 平均CT
   QuantiNova Probe PCR Kit 来自供应商L的Probe PCR kit
模板量,单位ng  0 h  100 h  0 h   100 h
 10  25.09  25.26  24.14  27.08
 1  28.51  28.66  27.50  30.51
 0.1  31.94  31.78  31.01  34.08
 无模板对照  无检测结果  无检测结果  无检测结果  无检测结果
表1.  对反应液放置于30°C 100小时之前和之后的CT值对比。Real-time PCR反应液包括预混液、cDNA模板、引物和探针,在30°C孵育100小时后,之后与刚制备的反应液同时进行real-time PCR反应。对三种不同模板量进行三次重复实验。对比试剂盒来自供应商L的基于探针技术的PCR试剂盒,QuantiNova Probe PCR Kit的CT值在反应液于30°C放置较长时间后没有变化。
准确、灵敏的检测单一DNA分子
QuantiNova Probe PCR Kit具有高度灵敏性,能够准确、灵敏的检测即使是一个拷贝(参见"Sensitive and robust detection of a single target copy")。该试剂盒提供的特制预混液能够在单管中检测两种丰度差异极大的靶基因。因此可节约时间、费用、以及所需样本量。此外,获得的双重PCR分析数据与单重PCR分析的数据相当(参见"Comparable results in duplex and singleplex PCR")。

对困难基因也能有出色表现
QIAGEN成熟的专有缓冲液技术与新型QuantiNova DNA Polymerase、QuantiNova Antibody和QuantiNova Guard配合起来,确保了real-time PCR实验的成功,无需进行费时、费试剂的反应条件优化;即使对挑战性模板也能实现成功扩增(参见"Superior results with challenging assays")。   

在多种real-time PCR仪上都有稳定表现
QuantiNova Probe PCR Kit可用于多种real-time PCR仪。试剂盒中以单管提供ROX染料,如使用需要ROX作为参比染料的PCR仪,则可加入该染料。该试剂盒在不同PCR仪上使用均可获得出色结果,具有灵敏性、可重复性和高效的特点。尽管不同的PCR仪使用不同的反应实验方案,该试剂盒都能获得稳定的结果(参见"Consistent results with various real-time PCR cyclers“)。
Principle
QuantiNova Probe PCR Kit采用新型的抗体介导的热启动技术,可对cDNA或gDNA进行单重或多重real-time PCR检测,具有高度特异性(参见"Novel antibody mediated hot-start mechanism")在温度较低时,QuantiNova DNA Polymerase在QuantiNova Antibody和新型添加剂QuantiNova Guard的作用下,出于非活性状态。严格的热启动机制能够防止引物的非特异性接合,以及防止生成引物二聚体。将温度升至95°C,两分钟后,QuantiNova Antibody和QuantiNova Guard发生变性,QuantiNova DNA Polymerase被激活,开始PCR扩增反应。
Procedure
QuantiNova Probe PCR Kit含有即用型预混液,因此无需优化反映条件。只需将gDNA或cDNA模板、引物和探针加入预混液,按照试剂盒使用手册中的实验方案进行反应,就可快速获得可靠结果。ROX参比染料在单管中另外提供,染料浓度可依据PCR仪种类进行调节,因此QuantiNova Probe PCR Kits可用于各种real-timePCR仪。由于ROX染料浓度经过优化,因此该试剂盒可通过自动数据分析,检测低拷贝数基因。
Applications
QuantiNova Probe PCR Kit可用于基于探针的cDNA基因表达分析和定量gDNA分析,适用于多种real-time PCR仪,包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的PCR仪。
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