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QuantiFast Multiplex PCR Kits

使用序列特异性探针进行快速的多重两步法RT-PCR,适用于基因表达分析

  • 灵敏检测单管中的多个目标
  • 快速获得结果,可节省多达50%的时间
  • 无需优化,即可成功进行多重PCR
  • 准确区分起始量相近的模板

应用QuantiFast Multiplex PCR Kit可在单管内通过多重两步法real-time PCR对多至4个cDNA进行快速、可靠的定量检测。Q-Bond和优化的预混液促进快速多重real-time PCR的进行,适用于快速或标准PCR仪。即用型预混液中的热启动酶和独特的PCR缓冲液可确保在所有real-time PCR仪上进行灵敏的qPCR,无需优化。有两种规格的试剂盒:QuantiFast Multiplex PCR Kit适用于需要ROX染料进行荧光信号校准的PCR仪,QuantiFast Multiplex PCR +R Kit适用于其他所有PCR仪。为便于使用,预混液可保存在2–8°C。

Cat No./ID: 204652
QuantiFast Multiplex PCR Kit (80)
Trial kit for 80 x 25 µl reactions: 1 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (with ROX dye), 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204654
QuantiFast Multiplex PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (with ROX dye), 2 x 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204656
QuantiFast Multiplex PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (with ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204752
QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (80)
Trial kit for 80 x 25 µl reactions: 1 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (without ROX dye), 45 µl ROX Dye Solution, 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204754
QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (without ROX dye), 210 µl ROX Dye Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204756
QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (without ROX dye), 1.05 ml ROX Dye Solution, 20 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204757
QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (4000)
For 4000 x 25 µl reactions: 2 x 25 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (without ROX dye), 2 x 1.05 ml ROX Dye Solution, 20 ml RNase-Free Water

QuantiFast Multiplex PCR Kits适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
PCR时间极大缩短。
使用QuantiFast Multiplex Kit进行两步法real-time RT-PCR,可缩短PCR总运行时间达50%(40个循环运行;与QuantiTect Multiplex Kit相比较)。I:iCycler iQ;L1:LightCycler 480;L2:LightCycler 2.0;A1:ABI PRISM 7900;A2:Applied Biosystems 7500 Fast System;M:Mx3005P。
1
灵敏的PCR,动态范围宽泛。
使用DNA模板混合物在Applied Biosystems 7500 Fast System上进行两次重复反应,混合物中包含108个拷贝的β-actin(数据在插图中显示)和106至10个拷贝的RPS27A (核糖体蛋白)。[A] QuantiFast Multiplex PCR +R Kit的灵敏度明显高于[B] Supplier AII的双重PCR试剂盒,使得在快速循环模式下运行的循环仪能够检测低至10拷贝的靶点,并定量超过6 log稀释范围的模板。
2
三重PCR和单重PCR的结果相当。
在LightCycler 480上使用QuantiFast Multiplex PCR +R Kit和采用Primer Express设计的针对 [A] RPS27A (一种核糖体蛋白)、[B] GAPDH (管家基因) 和 [C] UBC (管家基因) 的TaqMan Assay进行三重和单重PCR。模板为HeLa细胞cDNA (10 ng、1 ng或0.1 ng),进行两次重复反应。三重PCR (彩色曲线) 和单重PCR (灰色曲线) 的比较CT值证明了在分析不同丰度的靶点时,使用QuantiFast Multiplex PCR +R Kit进行三重PCR的可靠性。
3
高度灵敏性。
使用QuantiFast Multiplex PCR +R Kit和采用Primer Express设计的TaqMan Assay在Applied Biosystems 7500 Fast System上进行4重real-time PCR。使用10 ng Ramos细胞系cDNA进行三次重复反应。
4
退火时引物快速结合。
[A] QuantiFast Buffer中的Q-Bond能使DNA聚合酶和引物结合为单一复合物,将退火时间缩短至几秒。此外,独特的缓冲液组分可支持DNA的熔解,缩短变性和延伸时间。[B] 若无Q-Bond,引物和聚合酶会相继与模板结合,退火时间较长。
7
模板量降低,CT值仍呈线性。
在Applied Biosystems 7500 Fast System上使用QuantiFast Multiplex PCR +R Kit及针对t (8;14) 染色体易位和GAPDH的分析进行双重和单重PCR。使用Ramos细胞系的基因组DNA为模板 (10 ng至0.625 ng的两倍稀释),进行四重反应。在 [A] 单重和 [B] 双重反应中,CT值随着模板稀释度的降低呈线性升高,上升幅度为1个CT值,说明该试剂盒能够精确区分模板量的微小差异。
Performance

随QuantiFast Multiplex PCR Kit提供的特制的预混液可快速构建多重反应,得到的多重PCR反应结果可与单重PCR反应结果相媲美(参见"Comparable results in triplex and singleplex PCR")。该试剂盒可清楚区分模板量的细微差别。即使模板量仅有两倍的差别,该试剂盒也能精确定量丰度差别较大的2个靶基因(参见"Linear CT values over twofold decreases in template")。

QuantiFast Multiplex PCR Kits可节省多达50%的PCR反应时间,让您更快获得结果(参见"Significantly reduced PCR times")。只需60分钟,即可检测到低至10个拷贝的靶基因(参见"Sensitive duplex PCR and a wide dynamic range")。您可极大地提高样本通量或与其它使用者有效地共享PCR仪。该试剂盒可对多达4个靶基因进行快速、多重real-time PCR,且不会影响PCR效果(参见"Uncompromised sensitivity")。

Principle

QuantiFast Multiplex PCR Kits可在标准或快速PCR仪上快速、灵敏的获得反应结果,无需优化(参见"QIAGEN multiplex kits")。特制的快速PCR缓冲液含有新型Q-Bond成分,可明显缩短变性、退火和延伸的时间(参见"Fast primer annealing")。

在同一个反应中同时扩增对照和靶基因,而非分开反应,减少了操作误差,提高了检测的可靠性。QuantiFast Multiplex PCR Buffer 含有平衡配比的K+和NH4+以及独特的MP因子,二者可促进引物、探针与核酸模板的稳定高效结合,确保高效的PCR反应(参见"Unique PCR buffer")此外,HotStarTaq Plus DNA Polymerase要求严谨的热启动,可阻止非特异性产物的形成。

2x QuantiFast Multiplex PCR Kit的成分*
成分 特点 优势
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95ºC加热5分钟活化 在室温进行qPCR反应体系构建
QuantiFast Multiplex PCR Buffer 平衡的NH4+和K+离子配比 引物探针的特异性结合确保获得可靠结果
合成的MP因子 在单管中可靠的对至多4个基因进行多重分析
独特的Q-Bond添加剂 PCR运行时间缩短,更快获得结果,一天内可完成更多PCR反应
ROX染料 对Applied Biosystems和Agilent PCR仪进行荧光信号的校准 对需要ROX染料的PCR仪进行校准,不影响PCR反应结果
*也含有dNTP混合液(dATP、dCTP、dGTP和dTTP)。 ROX染料或者在预混液中,或者另外提供。
Procedure

QuantiFast Multiplex PCR Kit含有即用型预混液,无需优化反应及循环条件。只需将cDNA和引物探针对加入预混液中,按照操作手册进行实验,即可快速获得可靠的结果,适用于所有real-time PCR仪。试剂盒提供两种形式:预混液中含有或不含荧光校正用的ROX染料,可用于所有PCR仪(参见下表)。由于ROX浓度经优化,即使是低拷贝数也可通过数据自动分析进行检测。

选择合适的QuantiFast Multiplex PCR Kit
ROX染料试剂盒 适用的PCR仪
混合在预混液中 QuantiFast Multiplex PCR Kit 除Applied Biosystems 7500外的所有Applied Biosystems仪器
单独装在管中 QuantiFast Multiplex PCR +R Kit Applied Biosystems 7500、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent和其他供应商的PCR仪

为获得最佳的两步法real-time RT-PCR结果,我们建议使用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。该试剂盒可在20分钟进行快速cDNA合成,并去除基因组DNA污染。

QuantiFast Probe Assays利用序列特异性水解探针检测技术,是适合全基因组的预制试剂。 随QuantiFast Multiplex PCR Kit提供,可确保在双染两步法real-time RT-PCR反应中获得可靠结果。 

Applications

QuantiFast Multiplex PCR Kit可用在各种real-time PCR仪上对cDNA进行多重基因表达分析,适用仪器包括Agilent、Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf和Roche的PCR仪。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪或其他Rotor-Gene PCR仪上使用时,我们推荐使用专为快速PCR研发的Rotor-Gene Multiplex PCR Kit。

Features
Specifications
应用 Quantification of cDNA or genomic DNA targets in a multiplex real-time PCR
反应类型 Real-time two-step RT-PCR
real-time或终点法PCR Real-time
样本/目标类型 cDNA, DNA
单一或多重 Multiplex
SYBR Green I或序列特异性探针 Sequence-specific probes
热循环仪 Real-time cyclers dedicated for multiplex PCR (e.g., most Applied Biosystems real-time PCR cyclers, Roche LightCycler® 480, iCycler iQ®, Rotor-Gene)
有/无ROX Available with ROX in master mix and with ROX as separate vial

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试剂盒操作手册 (1)
For quantitative, multiplex, real-time PCR and two-step RT-PCR with fast cycling using sequence-specific probes
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