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miScript Plant RT Kit

用于植物miRNA和其他3'端修饰的小RNA的cDNA合成
  • 可针对3'端甲基化(2'-O-Me)修饰的小RNA进行通用型cDNA合成 
  • 可凭借单一cDNA合成反应进行成熟植物miRNA表达谱分析
  • 可凭借单一cDNA合成反应进行piRNA的表达谱分析
miScript Plant RT Kit是针对具有3’端甲基化(2'-O-Me)修饰的小RNA进行无偏差 cDNA合成的通用型试剂盒。本试剂盒专为基于实时定量PCR技术的小RNA表达分析应用设计和优化,能够配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay等产品使用。这一类通过功能验证的分析和芯片产品可应用于水稻、玉米、大豆、烟草和其他一些重要农业作物的检测,以及植物学相关的研究。在3’末端碱基具有2'-O-Me甲基化修饰的小RNA(如植物成熟miRNA和piwi互作RNA (piRNA))中,一般不具有poly A尾结构,因此无法通过多聚腺苷酸依赖的cDNA合成方法有效地反转录。专用的miScript Plant RT Kit通过首先向植物miRNA的3'末端连接一个接头解决了这一难题。不同于多聚腺苷酸化,这一链接反应不会受到植物miRNA 3'末端碱基上存在的2'-O-Me甲基化修饰的负面抑制。接头一旦连接成功,即可实现反转录反应。
Cat No./ID: 218760
miScript Plant RT Kit (12)
For twelve 20 µl first strand cDNA synthesis reactions; 10x miScript Ligation Buffer, 10x miScript Plant Adaptor, 2x miScript Ligation Activator, miScript Plant RNA Ligase, 5x miScript RT Buffer, 10x miScript Plant RT Nucleics, miScript Plant Reverse Transcriptase, RNase-Free Water
Cat No./ID: 218761
miScript Plant RT Kit (50)
For fifty 20 µl first strand cDNA synthesis reactions; 10x miScript Ligation Buffer, 10x miScript Plant Adaptor, 2x miScript Ligation Activator, miScript Plant RNA Ligase, 5x miScript RT Buffer, 10x miScript Plant RT Nucleics, miScript Plant Reverse Transcriptase, RNase-Free Water
Cat No./ID: 218762
miScript Plant RT Kit (96)
For ninety-six 20 µl first strand cDNA synthesis reactions; 10x miScript Ligation Buffer, 10x miScript Plant Adaptor, 2x miScript Ligation Activator, miScript Plant RNA Ligase, 5x miScript RT Buffer, 10x miScript Plant RT Nucleics, miScript Plant Reverse Transcriptase, RNase-Free Water

miScript Plant RT Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Performance
miScript Plant RT Kit与miScript Plant qPCR System的联合使用,能够确保针对植物样本实现灵敏和特异性的miRNA检测和定量工作。由于许多miRNA表达丰度很低,因此检测灵敏度对于确保获得可靠数据至关重要。miScript Plant qPCR System能够提供优异的灵敏度,宽广的动态监测范围,以及始终如一的高扩增效率。miScript Plant qPCR System的良好性能将帮助您于首次尝试时,即在技术重复和生物重复样本之间获得高度可重复的结果。
Principle
成熟的miRNA一般是长度为22个碱基的非编码RNA,能够介导转录后的基因调控。植物的miRNA和piRNA会在其3'末端碱基上形成2'-O-Me形式的甲基化修饰。因此,植物miRNA和piRNA的通用cDNA合成,需要通过连接反应来实现后续的反转录反应。

连接反应介导的反转录

miScript Plant RT Kit包含了针对植物成熟miRNA样本进行连接反应介导的通用型反转录所需的全部试剂;这些试剂包括10x miScript Ligation Buffer,10x miScript Plant Adaptor,2x miScript Ligation Activator,miScript Plant RNA Ligase,10x miScript Plant RT Nucleics,5x miScript Plant RT Buffer以及miScript Plant Reverse Transcriptase。进行连接反应介导的反转录时,小RNA被选择性地转换为cDNA。在反应的第一步,成熟的miRNA与一个接头相连接。在反应的第二步,连接好的miRNA被反转录为cDNA。

10x miScript Plant Adaptor包含了一个经过优化的预腺苷化接头,及一个人工合成的对照RNA(miScript Plant Ligation Control [miPLC]),后者被用于评估连接反应介导的反转录的反应性能。10x miScript Plant RT Nucleics包含了dNTPs、RT引物和一个合成的RNA-DNA杂交内参(miScript Plant Reverse-Transcription Control [miPRC]),后者也被用于检测反转录的反应性能。我们的5x miScript Plant RT Buffer产品具有正在申请专利的特有配方,能够促进成熟miRNA向cDNA的选择性转化,从而实现后续使用miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay的miRNA定量操作。  

通过real-time PCR进行miRNA的表达谱分析

使用miScript miRNA PCR Array(其中包含针对特定miRNA的miScript Primer Assay)和miScript SYBR Green Kit(其中包含miScript Universal Primer(反转录引物)和QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix)进行real-time PCR分析时,可采用miScript Plant RT Kit制备的cDNA做为模板。需要鉴定成熟miRNA的表达谱时,可向miScript miRNA PCR Array中加入含有cDNA、miScript Universal Primer、QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和去RNA酶水的混合物。

通过real-time PCR进行miRNA表达水平的定量

使用植物的miScript Primer Assay和miScript SYBR Green Kit产品进行Real-time PCR分析时,使用miScript Plant RT Kit制备的cDNA可做为模板。需要对成熟miRNA的表达水平进行定量时,可制备含有cDNA、miScript Primer Assay、miScript Universal Primer、QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和去RNA酶水的混合物,并加入到PCR反应管、Rotor-Disc或平板中。
Procedure
反转录反应可方便地进行。通常在连接反应介导的反转录反应中,一般使用含有3’端2'-O-Me修饰小RNA的总RNA做为起始材料。反转录是一个简单直接的操作步骤,包含了37℃下1小时的温育反应,以及之后在95℃下通过短暂孵育对反应进行失活。
Applications
miScript Plant RT Kit通常做为miScript Plant PCR System的一部分,用于进行:
  • 植物成熟miRNA的定量和表达谱分析
  • piRNA的定量和表达谱分析

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产品介绍与指南 (1)
QIAGEN provides solutions for the quantification of plant miRNAs with the miScript Plant qPCR System.
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