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Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit

在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行成功的基于HRM的基因分型分析的示范和评估
  • 在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上对基于HRM的基因分型进行成功评估
  • 包括2种预先优化的HRM分析(IV类A/T SNP和缺失)
  • 包括预混液、分析和模板DNA在内的全套试剂盒
  • 采用全新的EvaGreen荧光染料,可生成独特的熔解曲线
Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit展示了Type-it HRM试剂的高性能,结合Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪先进的热学和光学特性,适用于基因突变和SNP检测。使用Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit,对利用Rotor-Gene技术的高分辨率熔解(HRM)分析的可靠性和重复性进行全面评估。

Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
缺失分析。
9 bp基因缺失分析的预期结果。红色:WT(样本6);蓝色:100%突变(样本7);绿色:50%突变(样本8);灰色:20%突变(样本9)。
1
IV类SNP分析。
IV类SNP(A颠换为T)分析的预期结果。红色:WT(样本1);蓝色:突变(样本2);绿色:杂合基因(样本3)。
3
成功的A/T IV类SNP基因分型。
使用Type-it HRM PCR Kit对人GYS1基因进行SNP(rs2270938)基因分型,可获得高度可重复和准确的结果,但使用来自供应商QIII的预混液有很大差异。[A]标准化熔化曲线和差异曲线表明,使用Type-it HRM PCR Kit可成功、可靠地对三种基因型(野生型、杂合子和突变)进行IV类SNP基因分型。[B]使用来自供应商QIII的试剂盒进行同样的实验,无法区分同样位点的野生型和突变,导致基因分型不成功。[A][B] 蓝色:野生型;绿色:杂合子;红色:突变。
4
对难扩增的基因组位点进行高度特异性的成功扩增。
[A] Type-it HRM PCR Buffer确保扩增的高度特异性,能够实现对难扩增位点(如人类ENG基因外显子11,356 bp的片段,64%GC含量)。[B]与此相反,供应商R的试剂盒会生成非特异性产物,即使是预先优化了镁离子浓度。
5
高度准确的基因分型。
使用Type-it HRM PCR Kit在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上对人类ApoE基因的A/C II类SNP(rs405509)进行HRM分析。对指定基因类型的HRM分析表现为[A]标准化熔化曲线或[B]差异曲线。Type-it HRM PCR Kit确保高度准确的HRM分析。
Performance
Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit采用Type-it HRM试剂,可在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上实现基于HRM的基因分型分析评估。该试剂盒可通过高分辨率熔解(HRM)分析成功检测9 bp基因突变(参见Deletion assay)和/或第IV类SNP(A颠换至T)(参见Class IV SNP assay)。
在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上实现高性能HRM
Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪具有出众的热学和光学一致性,是一款极适用于HRM的real-time PCR仪。Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪具有多种特性,如特别调整的高强度HRM通道、全面的分析软件和高数据采集速率,即便是最具挑战性的HRM应用领域亦十分适用。Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪能够轻松鉴别熔点差异低于0.2°C的最复杂的IV类A/T SNP(参见Powerful data analysis enables identification of a class IV SNP)。
高特异性扩增
Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit提供了预先优化的2x HRM PCR Master Mix,其中包括HotStarTaq Plus DNA Polymerase和新型HRM PCR buffer system,即便是复杂的基因组位点(如IV类SNP)亦可实现高度特异的扩增并获得独特的熔解曲线(参见Successful genotyping of an A/T class IV SNPPowerful data analysis enables identification of a class IV SNPClass IV SNP assay)。它确保了目标PCR产物的特异性扩增,最大程度地降低了非特异性产物的生成和引物二聚体的形成(参见Highly specific and successful amplification of difficult genomic loci)。试剂盒中的预混液还包含EvaGreen染料,可生成独特的熔解曲线。
Principle
高分辨率熔解(HRM)是PCR反应之后进行的闭管分析方法,它引起了极大的科学关注,适用于各种应用领域,如基因分型、表观遗传学和病原体分型。随着温度的升高,双链DNA(dsDNA)解离为单链DNA(ssDNA),HRM根据双链PCR产物的解离(熔解)特性对其进行鉴别。根据序列、长度、GC含量或链互补性对PCR产物进行鉴别,敏感度可低至单个碱基对改变。利用该方法,可以简单且直接地对此前未知的甚至是复杂的序列变异(如具有挑战性的基因分型应用领域)进行检测和鉴别(参见Highly accurate genotyping by HRM analysis)。HRM较基于探针的基因分型分析更简单、更经济高效,且与传统的方法不同,它可以防止PCR反应后的残留污染。

使用Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪可轻松完成HRM,适用于:  
  • SNP基因分型
  • 突变检测
  • 病原体分型
  • 甲基化分析
可实现HRM技术轻松评估的预设计分析
Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit可通过高分辨率熔解分析检测缺失或SNP。HRM技术利用PCR扩增后的熔解特性,实现DNA样本的快速鉴定。Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit结合性能出众的HRM PCR Master Mix,展示了Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪的热学和光学性能。除预混液和模板DNA外,试剂盒还提供了2种预先优化的HRM分析——IV类A/T SNP(参见Class IV SNP assay)和缺失分析(参见Deletion assay)。此外,使用QIAgility可实现快速、高精度的PCR设置的紧凑型台式仪器,无需手动移液步骤。

新型EvaGreen染料,可生成独特的熔解曲线
2x HRM PCR Master Mix中还包含EvaGreen,它是第三代饱和荧光染料,可选择性结合双链DNA。与传统的SYBR Green I不同,使用较高浓度的EvaGreen不会引起PCR抑制,其对富含GC和AT的区域具有同等结合亲和力,无明显的序列偏好。因此,EvaGreen尤其适用于所有PCR产物类型的HRM分析,可观察到较小的荧光差异,生成独特的熔解曲线,从而确保获得标准化的结果。
预先优化的HRM PCR预混液
2x HRM PCR Master Mix包括HotStarTaq Plus DNA Polymerase和新型HRM PCR缓冲液体系。化学修饰的HotStarTaq Plus DNA Polymerase提供了严格的热启动特性,可以在室温下完成反应设置。HRM PCR Buffer的独特组分可确保极其严格且靶向的引物退火,从而实现了高特异性扩增。
Procedure
Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit可实现手动和自动反应设置。试剂盒手册提供了2种预先优化的实验方案,可实现便捷的反应设置,还提供了在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行HRM PCR的实验方案。手动反应设置实验方案包括两种分析的移液示意图。自动反应设置实验方案可采用QIAgility实现高精度的反应设置。HRM PCR实验方案中包括了预先优化的循环条件。
Applications
使用Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit,轻松证明了Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪和Type-it HRM试剂在基于HRM的基因分型应用领域(如SNP或突变检测)的成功使用。