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QuantiTect Probe PCR Kits

使用序列特异性探针进行两步法实时定量RT-PCR,用于基因表达分析

  • 高灵敏度检测低拷贝的模板
  • 准确检测各种起始量的模板
  • 可用各种序列特异性探针,用于各种PCR仪
  • 提供含有或不含尿嘧啶DNA糖基化酶(UNG)两种包装
  • 无需优化反应和循环条件

QuantiTect Probe PCR Kit使用序列特异性探针通过两步法real-time PCR对cDNA目标序列进行灵敏的定量分析。即用型预混液使用热启动和独特的PCR缓冲液,无需优化即可在各种real-time PCR仪上进行高度灵敏的定量PCR。dNTP混合液含有dUTP,可选择性进行UNG处理。为便于使用,预混液可储存在2–8°C。

Cat No./ID: 204343
QuantiTect Probe PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Probe PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204345
QuantiTect Probe PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect Probe PCR Master Mix, 20 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204363
QuantiTect Probe PCR +UNG Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Probe PCR Master Mix, 100 ul UNG Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water

QuantiTect Probe PCR Kits适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
高效的UNG酶切。
采用UNG处理或不处理两个106个拷贝的含有dUMP的PCR扩增片段,然后进行real-time PCR扩增。UNG来自不同的供应商,使用QuantiTect Probe PCR +UNG Kit中的预混液进行real-time PCR。Y轴上的ΔCT表示UNG处理的样本的CT值减去未经UNG处理的样本的CT值。QuantiTect Kit提供的UNG具有最高的ΔCT (9-12个循环)。这说明QIAGEN UNG对残留PCR产物的酶切效率高于其他供应商的UNG。
1
两步法RT-PCR。
QuantiTect Probe PCR Kit避免了繁琐且耗时的反应条件优化过程。只需将引物、探针和cDNA模板加入即用型PCR预混液,在任意一台real-time循环仪上开始反应即可。
2
高度特异性扩增。
相比其他DNA聚合酶,只有HotStarTaq DNA Polymerase结合独特的缓冲液可以特异性扩增497 bp的片段(在1 µg人基因组DNA背景下的50个拷贝的HIV-pol基因重组体)。M:分子量标准。
3
两步法PCR实现对低至高模板量的准确分析。
在Mx3005P上使用10倍稀释的人白细胞cDNA (10 ng至0.01 ng) 和针对IL1R2 (一种细胞因子) 的TaqMan Assay进行两次重复反应。使用QuantiTect Probe PCR Kit可实现从低模板量至高模板量的准确基因表达分析,PCR效率为101%。
4
real-time PCR实现对低至高模板量的准确检测。
使用QuantiTect Probe PCR +UNG Kit进行UNG预处理的基于探针的real-time PCR。在ABI PRISM 7900上使用10倍稀释的人白细胞cDNA (100 ng至10 pg) 和针对IL8 (一种细胞因子) 的TaqMan Assay进行两次重复反应。扩增曲线分布均匀,PCR效率高达94%。
5
高灵敏度、高效率。
在Mx3005上使用QuantiTect Probe PCR Kit及IL8 (白介素8) 特异性的引物和FAM标记的探针分析10倍连续稀释的白细胞cDNA (100 ng至1 pg),反应重复两次。在6 log模板稀释度范围内的PCR效率达97%,可实现低至1 pg的IL8转录本的灵敏检测。
Performance

QuantiTect Probe PCR Kit配合QuantiTect Reverse Transcription Kit可得到灵敏、可靠的结果(参见"High sensitivity and efficiency, and wide dynamic range")。独特的PCR缓冲液组分使QuantiTect Probe PCR Kit能够高灵敏度的定量检测低拷贝的DNA靶序列,在宽泛的范围内符合线性规律,实现准确定量检测(参见"Wide dynamic range in two-step RT-PCR")。与其他聚合酶相比,HotStarTaq DNA Polymerase具有严谨的热启动,进一步提高了PCR反应的特异性(参见"Highly specific amplification")。

PCR污染的主要来源是PCR产物中的残余DNA污染。在PCR前使用UNG预处理,可确保污染的PCR产物不会影响后续的PCR。QuantiTect Probe PCR +UNG Kit中经特别优化的UNG溶液配合经验证的PCR预混液可有效避免PCR产物污染,并对靶序列进行可靠的定量(参见"Effective UNG digestion"和"Wide dynamic range in real-time PCR")。

Principle

QuantiTect Probe PCR Kit含有优化的即用型预混液,可使用序列特异性探针对cDNA靶序列进行高特异性和灵敏度的real-time定量分析。此试剂盒适用于各种类型的序列特异性探针,包括水解探针检测(如TaqMan和其他双标记探针)、FRET探针和Molecular Beacons。QuantiTect Probe PCR Kit独特的PCR缓冲液含有K+和NH4+,能促使特异性引物退火,获得高PCR特异性和灵敏度(参见"Specific primer annealing")。此外,HotStarTaq DNA Polymerase具有严格的热启动,可防止非特异性产物的形成。

QuantiTect Multiplex PCR Master Mix含有dUTP,可在PCR前使用尿嘧啶DNA糖基化酶 (UNG)预处理,保证污染的PCR产物不会影响后续的PCR反应。

2x QuantiTect Probe PCR Kit的组份
组份 特点 优势
HotStarTaq DNA Polymerase 95ºC孵育15分钟即可活化 室温下即可构建qPCR反应体系
QuantiTect Probe PCR Buffer NH4+和K+的平衡组合 特异性引物退火确保PCR结果可靠
dNTP mix 含有dUTP,会部分替代dTTP,可进行UNG处理 可选择进行UNG处理,以消除PCR产物中的残余污染物
ROX dye 在Applied Biosystems或Agilent的PCR仪上进行荧光信号校准 可在需要ROX染料的PCR仪上进行准确的定量检测。不会干扰其他real-time PCR仪
Procedure

QuantiTect Probe PCR Kit无需进行繁琐耗时的反应条件优化。只需简单地将引物、探针和cDNA模板加入到即用型PCR预混液中,即可开始反应(参见"Two-step RT-PCR")。使用操作手册中的实验方案可在任何real-time PCR仪上得到快速、可靠的结果。如果需要,反应液可用尿嘧啶DNA糖基化酶(UNG)预处理,以去除PCR产物中残留的污染。

为在两步法real-time RT-PCR中获得理想结果,我们推荐使用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。此试剂盒可在20分钟内快速合成cDNA,并可去除基因组DNA污染。

Applications

QuantiTect Probe PCR Kit可用于在各种real-time PCR仪上对cDNA目标序列进行基因表达分析,包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的仪器。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上使用时,我们推荐专门为快速PCR研发的Rotor-Gene Probe PCR Kit。

Features
Specifications
应用 Real-time quantification of DNA, cDNA, or RNA targets
反应类型 PCR and two-step RT-PCR
real-time或终点法PCR Real-time
样本/目标类型 DNA, cDNA, RNA
单一或多重 Single
SYBR Green I或序列特异性探针 Sequence-specific probes
热循环仪 Most real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
有/无ROX With ROX

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