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miScript Microfluidics PreAMP Kit

适用于利用Fluidigm BioMark System进行real-time PCR miRNA分析之前的cDNA预扩增
  • 经过精心设计,可与Fluidigm Biomark System结合使用
  • 适用于miRNA预扩增的突破性技术
  • 无偏差、可重复的结果
  • 可靠的步骤
  • 完全整合至miScript PCR微流体学工作流程
使用miScript Microfluidics PreAMP Kit对样本进行预扩增,在Fluidigm BioMark System上使用96.96或48.48 Dynamic Array IFC进行miRNA定量。适用于微流体学的miScript PCR系列产品采用了突破性的技术,在Fluidigm BioMark System上,只需10 ng总RNA即可实现准确且全方位的miRNA表达分析。在一次反应中对多达400种miRNA特异性的cDNA靶点进行多重PCR预扩增,每个靶点可实现1000–4000倍的扩增。预扩增大大降低了分析样本的要求。一次1 ng cDNA合成反应可用作至多10次预扩增反应的模板。
Cat No./ID: 331455
miScript Microfluidics PreAMP Kit (96)
For 96 preamplification reactions: 2 x 300 µl 5x miScript PreAMP Buffer, 2 x 120 µl HotStarTaq DNA Polymerase (2 U/μl), 2 x 60 µl miScript PreAMP Universal Primer (10 µM), 2 x 96 ml SR1 Reagent

miScript Microfluidics PreAMP Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Performance
为下游实验打下良好基础
在Fluidigm BioMark System上进行real-time PCR使用的反应体积较少,这要求对试剂和条件(包括起始RNA)进行精心优化。miScript Microfluidics PreAMP Kit确保RNA样本包含足够的靶点,在Fluidigm BioMark System上能够实现可靠的miRNA定量。
可重复的结果和可靠的步骤
使用miScript Microfluidics PreAMP Kit进行预扩增,步骤可靠,由不同用户进行重复实验,可提供一致且可重复的结果。
Principle
适用于微流体学的miScript PCR系列产品使研究人员能够在Fluidigm BioMark System上使用极少量的起始RNA进行miRNA谱分析实验。使用Fluidigm BioMark System,可在一块芯片上完成至多9216(96 x 96)或2304(48 x 48)次反应的高通量实验。利用该突破性技术,只需10 ng总RNA即可实现准确且全方位的表达分析。一次10 ng cDNA合成反应可用作至多10次预扩增反应的模板。miScript Microfluidics PreAMP Kit在一次反应中对多达400种miRNA特异性的cDNA靶点进行多重PCR预扩增,每个靶点可实现1000–4000倍的扩增。
Procedure
在Fluidigm BioMark System上进行miRNA谱分析需要进行下列3个步骤:
  • 使用miScript II RT Kit进行逆转录
  • 使用miScript Microfluidics PreAMP Kit和miScript PreAMP Primer Mix进行预扩增
  • 使用miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay和miScript Microfluidics PCR Kit进行Real-time PCR
逆转录
miScript II RT Kit中包含两种缓冲液:5x miScript HiSpec Buffer和5x miScript HiFlex Buffer。miScript HiSpec Buffer可简化成熟miRNA至cDNA的选择性转化。miScript HiSpec Buffer是制备用于后续预扩增(使用miScript Microfluidics PreAMP Kit)的cDNA的唯一缓冲液。在使用miScript Microfluidics PreAMP Kit进行预扩增之前,切勿使用miScript HiFlex Buffer。

预扩增
使用miScript Microfluidics PreAMP Kit及相应的miScript PreAMP Primer Mix进行预扩增,可实现目的miRNA靶点的无偏差扩增。反应包括一个重要的副反应削弱步骤,使real-time PCR中潜在的非特异性反应最小化。对于每种miScript miRNA PCR Array,都有经过确认的专用miScript PreAMP Primer Mix,其中包括可以对芯片靶向的miRNA进行选择性预扩增的引物。

使用miScript Primer Assay进行real-time PCR时,必须将单独的miScript Primer Assay混合,制备miScript PreAMP Primer Mix,进行预扩增。

利用real-time PCR进行miRNA谱分析
预扩增的cDNA可以在使用成熟miRNA特异性的正向引物(包括在miScript miRNA PCR Array中或者作为单独的miScript Primer Assay提供)和miScript Microfluidics PCR Kit进行real-time PCR分析中用作模板,miScript Microfluidics PCR Kit中包含miScript Microfluidics Universal Primer(反向引物)和Microfluidics qPCR Master Mix(已经过优化,适用于Fluidigm BioMark System,包含可用于检测的EvaGreen染料和ROX参比荧光染料)。miScript miRNA PCR Array(Format M)适用于96.96 Dynamic Array IFC。此项领先的miRNA表达谱分析技术采用了预先干燥的miRNA特异性的正向引物,引物浓度适合在Fluidigm BioMark System上使用。
Applications
miScript Microfluidics PreAMP Kit简化了适用于Fluidigm BioMark System的cDNA的预扩增,可实现:
  • 高通量、成熟miRNA定量和谱分析
  • 血清或血浆中的生物标记物发现

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产品介绍与指南 (1)
Simultaneously profile mRNA, miRNA and lncRNA using a simple, complete workflow
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