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Certal Residual DNA Detection Kits

基于探针技术灵敏检测残留的宿主细胞DNA,包含内参

  • 卓越的重复性,最小限度定量
  • 线性范围宽
  • 内参可靠准确
  • 优化的方案,适用于多种real-time PCR仪
  • 完整的试剂盒,包括内参和阳性对照

在生物制药中,评估最终的治疗材料确保无污染物质至关重要,如来自宿主细胞的残留DNA。Certal Residual DNA Detection Kits使用双标记水解探针(即TaqMan探针),通过real-time PCR灵敏和快速的定量残留的宿主细胞基因组DNA。Certal CHO Detection Kit包含进行双重real-time PCR的试剂,用于检测CHO残留的宿主细胞DNA,以及Certal Internal Control。该试剂盒还包含Certal Residual DNA Positive Control,用于存在CHO宿主细胞DNA信号时验证PCR分析的功能,以及2种不同浓度的ROX阴性对照染料,能够用于几乎所有的real-time仪器。

Cat No./ID: 211822
Certal CHO Detection Kit (100)
For 100 x 25 µl reactions: 1.25 ml Certal Residual DNA PCR Master Mix, Certal Internal Control DNA and Assay, CHO DNA Positive control and CHO-Assay, 100 µl Uracil-N-Glycosylase, 210 µl High-ROX Dye Solution, 210 µl ROX Dye Solution, Nucleic Acid Dilution Buffer, TE Buffer
The Certal Residual DNA Detection Kits are intended for molecular biology applications in pharmaceutical product testing. These products are not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.

See trademarks.


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可靠检测QIAGEN内参。
在Certal ResDNA Master Mix中加入靶序列(CHO)的引物和探针,以及内参。内参模板和样本模板加入后,反应开始,可以在多种PCR仪上进行反应。也可以选择性检测阳性CHO对照,可使用UNG进行处理,消除PCR产物的残留污染。
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Certal Residual DNA Detection Kit实验流程。
在Certal ResDNA Master Mix中加入靶序列(CHO)的引物和探针,以及内参。内参模板和样本模板加入后,反应开始,可以在多种PCR仪上进行反应。也可以选择性检测阳性CHO对照,可使用UNG进行处理,消除PCR产物的残留污染。
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在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR仪上灵敏、可靠的检测CHO基因组DNA。
图中曲线分布均匀,内参CT值稳定,说明在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上使用Certal Residual DNA Assay检测DNA具有高度可靠性,也表明CHO基因组DNA的浓度没有影响对内参的灵敏检测。
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检测最低阈限。
检测阈限(LOD)是指重复24次检测都获得100%阳性扩增结果的最低DNA浓度,Certal CHO Detection Kit Assay的检测阈限是1 fg。定量检测阈限(LOQ)是指计算获得的CT值与CT标准值误差在±0.5以内的最低浓度,为10 fg。
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在多种PCR仪上进行灵敏、可靠的检测。
在多种常用的PCR仪上使用Certal CHO Detection Kit检测起始量为3 fg至30 ng的DNA。检测结果符合线性规律,表示在不同的qPCR仪上,Certal试剂盒均能获得可靠结果。
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高度灵敏、可靠的检测。
在Applied Biosystems ABI 7900 HT(384孔板规格)上使用Certal CHO Detection Kit检测CHO DNA(0.3 fg至300 ng)。起始DNA量为10 fg至300 ng时,检测十分灵敏、阈限低,符合线性规律。LOQ: 定量检测阈限,是指计算获得的CT值与CT标准值误差在±0.5以内的最低浓度。这一数值为实验得出:未知样本的平均CT值与标准曲线的偏差不能大于0.5。LOD: 检测阈限,是指重复24次检测都获得100%阳性扩增结果的最低DNA浓度。
Performance

Certal Residual DNA Detection Kits能够灵敏、可靠的定量检测残留的基因组DNA(gDNA),这对生产安全和可靠的生物制品至关重要(参见"Highly sensitive and reliable detection")。检测残留的DNA需要最小限度的检测和高线性范围,以确保可靠的检测,即使残留的gDNA的水平很低(参见"Low limit of detection")。Certal Residual DNA Detection Kits与多种循环仪兼容,提供灵敏、可靠的数据(参见"Sensitive and reliable detection on a wide range of cyclers"和"Sensitive and reliable detection of CHO genomic DNA on the Rotor-Gene Q")。

为确保安全,Certal Residual DNA Detection Kits包含QIAGEN Internal Control,专门设计用于正确解读阴性结果且不干预目标分析。QIAGEN Internal Control与基因组DNA共扩增时能够可靠的检测到(参见"Reliable detection of the QIAGEN Internal Control")。

Principle

为了确保最终的治疗材料中无来自宿主细胞的污染物,该宿主细胞用于生产生物制品,Certal Residual DNA Detection Kits运行预订的分析特异性检测CHO宿主细胞DNA。Certal Residual DNA Assay由优化的引物对和一个用于可靠检测残留的CHO基因组DNA的FAM标记的水解探针组成。人类DNA和Certal Internal Control DNA不会干扰Certal Residual DNA Assay。

预混的Certal Internal Control Assay包括正向反向引物和用于检测Certal Internal Control DNA的MAX标记的水解探针。Certal Internal Control Assay已经过特殊优化,可防止Certal Residual DNA Assays的干扰。Certal Residual DNA Positive Control通过检测扩增反应本身的功能,能够正确解读阴性结果。

Certal ResDNA PCR Buffer已经过优化,用于灵敏、可靠的定量双重real-time PCR结果。预混液还包括dUTP,能够在开始PCR前用尿嘧啶正糖苷酶预处理,以确保污染的PCR产物不影响随后的PCR反应。

Certal Residual DNA Detection Kit的组成
组分特征 优势
Certal Residual DNA Assays和DNA对照
50x Certal Residual DNA Assay 预订的、经优化和验证的引物-探针组(FAM标记) 可靠检测残留的CHO宿主细胞DNA
Certal Residual DNA阳性对照 由Certal Residual DNA Assay扩增的阳性对照DNA 在检测不到残留的宿主细胞DNA时,验证Certal Residual DNA Assay是正确工作的
50x Certal Internal Control Assay 预订的、经优化和验证的引物-探针组(MAX标记)用于Certal Internal Control DNA检测 只特异性检测Certal Internal Control DNA。经优化防止Certal Residual DNA Assays的干扰
Certal Internal Control DNA 由Certal Internal Control Assay扩增的Internal Control DNA 排除PCR抑制剂存在或在纯化过程中控制纯化和扩增
Certal ResDNA PCR Master Mix
HotStarTaq DNA Polymerase    95°C条件下激活15 分钟 室温下设置qPCR反应
Certal ResDNA PCR Buffer KCl和(NH4)2SO4的平衡组合 特异性引物退火,确保可靠的PCR结果
Synthetic Factor MP 同一管中可靠的多重分析4个基因
dNTP mix 包括dUTP,部分取代dTTP和可选的UNG 处理 当反应使用尿嘧啶正糖苷酶(UNG)预处理时,有效去除PCR产物的遗留
外加组分
50x ROX Dye Solution 含阴性对照染料的分离管,用于标准化在Applied Biosystems 7500 real-time PCR体系上的荧光信号。可选:可用于来自Agilent的Stratagene仪器 准确定量需ROX染料的循环。不干扰在任何real-time循环仪上的PCR
50x High-ROX Dye Solution 含阴性对照染料的分离管,用于标准化在Applied Biosystems 7900和StepOne real-time PCR体系上的荧光信号
Uracil-N-Glycosylase (UNG) 纯化的、无核酶的重组酶,在分离管中 有效去除PCR产物的遗留
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer 专有的缓冲配方,用于稀释和贮存核酸标准品 在稀释和反应建立过程中稳定RNA和DNA标准品,以及防止塑料表面核苷酸的损失,如管子和枪头
Certal Residual DNA Detection Kit还包括用于重组冻干制剂分析的Buffer TE和RNase-free水。
Procedure

Certal Residual DNA Detection Kits提供简单的流程用于检测宿主细胞DNA,包含Certal Internal Control和Certal Residual DNA Positive Control(参见"Certal Residual DNA Detection Kit procedure")。只需简单的将预混液与Certal Residual DNA Assay、Certal Internal Control Assay和Certal Internal Control DNA混合,然后加入DNA样本或Certal Residual DNA Positive Control。该试剂盒的操作手册上有优化的方案,用于多种循环仪。ROX提供不同浓度的2管,用于多种real-time仪器(参见下表)。

选择正确的ROX浓度
ROX染料溶液
仪器 不需要 ROX染料溶液 高浓度ROX染料溶液
Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪 X
Rotor-Gene 6000和Rotor-Gene 3000 X
Applied Biosystems 7500和ABI ViiA7 X
Applied Biosystems 7900HT、StepOne and StepOne Plus、ABI PRISM 7700、7000和7300 X
Mx3000P、Mx3005P和Mx4000 X 可选
iCycler iQ System X
LightCycler 480 X
Applications

Certal Residual DNA Detection Kits使用用于检测宿主细胞DNA的序列特异性探针进行灵敏的real-time PCR,包括内参。该试剂盒可用于多种real-time PCR仪,包括来自QIAGEN、Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche和Agilent的PCR仪。

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试剂盒操作手册 (1)
For sensitive real-time PCR detection of residual host cell DNA and an internal control using sequence-specific probes
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