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QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit

基于SYBR Green I的一步法qRT-PCR用于基因表达分析
  • 独特的两步热启动程序使得体系构建可在室温条件下进行
  • 可显色的加样对照,减少加样错误
  • 内质控可用于验证RT-PCR是否成功的阳性对照
  • 可在几个数量级范围内对模板精确定量
  • 超快速、通用实验方案,适用于任何标准或快速PCR仪
QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit基于SYBR Green I染料方法,可对RNA靶标进行灵敏的一步法实时定量检测。该试剂盒具有多重综合保障设置,可有效去除各种波动因素并消除人为误差,确保获得可靠的基因表达谱。独特的两步热启动流程与预混液形式的PCR缓冲体系搭配,使您可以在室温条件下进行实验体系构建,并保证在任何一台实时PCR仪上均能获得高度灵敏的qRT-PCR结果。QuantiNova Internal Control RNA可用于检测逆转录和扩增反应是否成功,可反映仪器或反应试剂是否正常,以及构建的反应体系是否存在错误,包括是否存在抑制剂。另外,可视化的颜色指示剂有助于减少加样错误,确保可在1小时之内完成超快速的RT-PCR处理。
Cat No./ID: 208152
QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit (100)
For 100 x 20 µl reactions: 1 ml QuantiNova SYBR Green RT-PCR Master Mix, 20 µl QuantiNova SYBR Green RT Mix, 20 µl Internal Control RNA, 500 µl Yellow Template Dilution Buffer, 250 µl ROX Reference Dye, 1.9 µl RNase-Free Water
Cat No./ID: 208154
QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit (500)
For 500 x 20 µl reactions: 3 x 1.7 ml QuantiNova SYBR Green RT-PCR Master Mix, 100 µl QuantiNova SYBR Green RT Mix, 100 µl Internal Control RNA, 500 µl Yellow Template Dilution Buffer, 1 ml ROX Reference Dye, 2 x 1.9 µl RNase-Free Water
Cat No./ID: 208156
QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit (2500)
For 2500 x 20 µl reactions: 15 x 1.7 ml QuantiNova SYBR Green RT-PCR Master Mix, 5 x 100 µl QuantiNova SYBR Green RT Mix, 2 x 100 µl Internal Control RNA , 5 x 500 µl Yellow Template Dilution buffer, 5 x 1 ml ROX Reference Dye, 10 x 1.9 µl RNase-Free Water
Cat No./ID: QT02589307
QuantiNova IC SYBR Green Assay
QuantiTect Primer Assay for SYBR-based detection of QuantiNova Internal Control RNA; available via GeneGlobe (sufficient for approx. 500 x 20 µl rxn). For use with QuantiNova SYBR Green PCR Kit or QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit
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QuantiNova新型两相热启动原理
在环境温度下,HotStaRTScript活性被RT-Blocker抑制,同时 QuantiNova DNA Polymerase在QuantiNova Antibody和QuantiNova Guard作用下处于失活状态。当温度达到50°C时,逆转录启动,但QuantiNova DNA Polymerase仍处于失活状态。温度达到95°C以后,逆转录酶变性失活, DNA聚合酶激活。
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内置加样对照准确指示反应构建正确与否。
预混液包含一种惰性蓝色染料。与QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer混合后,溶液的颜色会从蓝色变为绿色,从而指示出反应体系构建正确与否。
Performance
QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit使用两步法的热启动操作流程。这一操作流程包括,在50°C下热激活HotStaRT-Script逆转录酶,在95°C下热激活PCR聚合酶。在低于50°C时,HotStaRT-Script和一种RT-Blocker分子形成复合体,进入失活状态。当温度达到50°C时,复合物分解, 释放出活性状态的HotStaRT-Script酶。QuantiNova DNA Polymerase在QuantiNova Antibody和一种新型添加剂QuantiNova Guard的作用下一直处于失活状态,其中QuantiNova Guard起着保持复合物稳定性的作用。这种设计使得热启动操作流程的严格程度进一步提高,避免了非特异性退火引物延伸或形成引物二聚体。温度达到95°C后两分钟内,QuantiNova Antibody和QuantiNova Guard发生变性,QuantiNova DNA Polymerase激活,PCR扩增开始。这一独特的两步法热启动操作流程使得反应构建工作可在室温下稳定保持2小时以上,消除了假阳性结果出现的可能,并可实现体系构建的自动化。

新研发的内质控是一种成分明确的转录本(RNA分子),可直接加入您的样本并被同时逆转录为cDNA。这种内质控可以直接反应仪器或相应试剂是否正常,实验构建的体系是否存在错误,以及反应体系中是否存在抑制剂。由于内质控的表现和真实转录本相似,因而可用来确认逆转录和PCR扩增过程的成功与否。

QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit随附的预混液中包含一种惰性蓝色染料,这种染料不会干扰逆转录或real-time PCR进行,但可增加试管或板孔中液体溶液的可见性。QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer包含一种惰性黄色染料,将使用QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer稀释的模板核酸加入预混液后,溶液的颜色会从蓝色变为绿色,从而通过颜色变化指示出加样和反应构建正确与否。

QuantiNova DNA Polymerase以及RT-PCR缓冲液的独特配方组合,使您可以灵敏地定量检测低拷贝RNA靶标,并且可以在任何一台普通PCR仪上进行宽线性范围的精确定量。
Principle
QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit包含经优化的即用型预混液,可通过SYBR Green I荧光染料进行高度特异、灵敏的实时定量检测RNA靶标。该试剂盒包含一种独特的K+和NH4+离子平衡PCR缓冲液,可以提高引物退火特异性,实现检测的高特异性和高灵敏度。此外,HotStaRT-Script合成cDNA可兼容的模板量范围极广,同时,QuantiNova DNA Polymerase具有严格的热启动程序,避免了非特异性产物的生成。独特的两步法热启动流程使得体系构建可在室温下稳定保持2小时以上,并可支持自动化体系构建。

​内置的可视化显色对照可用来指示模板是否已加入反应体系,从而避免实验操作过程中的加样错误。

检测cDNA的合成情况,可以验证实验结果的可重复性。我们新研发的内质控是一种序列已知的转录本(RNA分子),可选择性加入到您的样本中并被同时逆转录为cDNA。其可直接反应仪器或相应试剂是否正常,实验构建的体系是否存在错误,以及反应体系中是否存在抑制剂。
Procedure
QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit使您不需要对反应条件进行优化,省去了大量麻烦,节省了时间。只需将引物、RNA模板和逆转录混合物加入即用型SYBR Green RT-PCR预混液,反应即可开始。根据QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit说明书内的实验方案操作,即可在任意一台real-time PCR仪上迅速获得可靠的结果。
Applications

QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit可用于在任何一台real-time PCR仪上检测RNA靶标的表达水平。其适用的PCR仪包括QIAGEN的Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪,以及Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent等公司的仪器。

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