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QuantiNova Probe RT-PCR Kit

使用序列特异性探针进行一步法qRT-PCR,用于基因表达分析
  • 独特的二阶段热启动程序,用于室温下反应体系构建
  • 便利的观察移液,减少移液失误
  • gDNA去除步骤,可获得更准确的定量结果
  • 内置阳性对照品,验证RT-PCR全过程的准确无误
  • 双重监控因子,包括内置对照或者参考基因
  • 准确检测各种起始量的模板
QuantiNova Probe RT-PCR Kit 使用序列特异性探针的real-time一步法PCR,可实现RNA目的序列的灵敏定量。多种安全技术的结合使用可去除变异,防止错配,确保可靠的基因表达分析结果。该试剂盒内即用型预混液结合一种独特的二阶段热启动程序和PCR缓冲液系统,可实现室温下的反应体系构建,在不同的real-time PCR仪上进行高度灵敏的qRT-PCR反应。QuantiNova内控RNA可用于监控逆转录过程和扩增过程的准确。它会提示仪器报错或者试剂出错、体系积构建错误以及存在抑制剂。更为重要的是,可视染料便于减少移液失误;gDNA去除步骤可防止gDNA过量引起的转录子定量错误。
Cat No./ID: 205813
QuantiNova IC Probe Assay (200)
400 µl primer / probe mix (10x) for 200 reactions, detects Internal Control RNA; use with QuantiNova Probe PCR Kit or QuantiNova Probe RT-PCR Kit
Cat No./ID: 208352
QuantiNova Probe RT-PCR Kit (100)
For 100 x 20 µl reactions: 1 ml QuantiNova Probe RT-PCR Master Mix, 20 µl QuantiNova Probe RT Mix, 20 µl Internal Control RNA, 500 µl Yellow Template Dilution Buffer, 250 µl ROX Reference Dye, 1.9 µl RNase-Free Water
Cat No./ID: 208354
QuantiNova Probe RT-PCR Kit (500)
For 500 x 20 µl reactions: 3 x 1.7 ml QuantiNova Probe RT-PCR Master Mix, 100 µl QuantiNova Probe RT Mix, 100 µl Internal Control RNA, 500 µl Yellow Template Dilution Buffer, 1 ml ROX Reference Dye, 2 x 1.9 µl RNase-Free Water
Cat No./ID: 208356
QuantiNova Probe RT-PCR Kit (2500)
For 2500 x 20 µl reactions: 15 x 1.7 ml QuantiNova Probe RT-PCR Master Mix, 5 x 100 µl QuantiNova Probe RT Mix, 5 x 100 µl Internal Control RNA , 5 x 500 µl Yellow Template Dilution buffer, 5 x 1 ml ROX Reference Dye, 10 x 1.9 µl RNase-Free Water
Cat No./ID: QT02589307
QuantiNova IC SYBR Green Assay
QuantiTect Primer Assay for SYBR-based detection of QuantiNova Internal Control RNA; available via GeneGlobe (sufficient for approx. 500 x 20 µl rxn). For use with QuantiNova SYBR Green PCR Kit or QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit

QuantiNova Probe RT-PCR Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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一步法RT-PCR的表现可与两步法RT-PCR相媲美— B。
在Mx3005上使用ILR2(白介素1受体II型)特异性的引物和FAM标记的探针分析10倍梯度稀释的白细胞RNA(100 ng至1 pg),反应重复两次。使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit进行一步法RT-PCR(PCR效率:104%)。
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一步法RT-PCR的表现可与两步法RT-PCR相媲美— A。
在Mx3005上使用IL1R2(白介素1受体II型)特异性的引物和FAM标记的探针分析10倍梯度稀释的白细胞cDNA(100 ng至1 pg),反应重复两次。使用QuantiTect Probe PCR Kit进行两步法RT-PCR(PCR效率:101%)。
2
Principle of the novel QuantiNova two-phase hot-start mechanism.
At ambient temperature the HotStaRTScript is inhibited by the RT-Blocker and the QuantiNova DNA Polymerase is kept inactive by QuantiNova Antibody and QuantiNova Guard. At 45°C the RT is activated while the QuantiNova DNA polymerase remains inactive. At 95°C the RT enzyme is denatured and the DNA polymerase is activated.
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高度灵敏且高效的反应。
在ABI PRISM 7900上使用QuantiTect Probe PCR Kit及人28S rRNA特异性的引物和HEX标记的探针分析10倍梯度稀释的HeLa细胞RNA(100 ng至1 pg)。在6 log模板稀释度范围内具有高PCR效率。
4
退火时引物特异性结合。
退火时,缓冲液中浓度平衡的KCl和(NH4)2SO4促进引物和探针特异性与模板结合。K+结合到双链DNA上的磷酸基团,稳定引物和探针。NH4+则破坏弱的错配碱基之间的氢键。
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Accurate reaction setup indicated by the built-in pipetting control.
The master mix contains an inert blue dye. Combined with QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer, the resulting solution turns green, indicating that the reaction was set up correctly.
Performance
QuantiNova Probe RT-PCR Kit使用二阶段热启动程序,包括热介导的两个活化过程, HotStaRT-Script逆转录酶45°C活化和PCR聚合酶95°C活化。HotStarRT-Script逆转录酶在低温时与RT-Blocker分子形成混合物的非活化状态。当温度达到45°C,该混合物分离则HotStaRT-Script逆转录酶活化。QuantiNova DNA聚合酶在QuantiNova Antibody和新型添加剂QuantiNova Guard的作用下,处于非活性状态。严格的热启动机制能够防止引物的非特异性接合,以及防止生成引物二聚体。将温度升至95°C,五分钟后,QuantiNova Antibody和QuantiNova Guard发生变性,QuantiNova DNA Polymerase被激活,开始PCR扩增反应。这个独特的二阶段热启动程序可使反应体系构建在室温下保持稳定至少2小时,防止非特异性产物的产生,也便于自动化加样的实现。

gDNA去除步骤可降低基因组DNA过量引起的错误定量,这对于基因表达结果的准确非常重要,也无需设计RNA特异性引物或者探针。此gDNA去除步骤可节约时间降低成本,因为RNA样本纯化以后无需另外的DNA酶消化过程。
 
新开发的内对照是已知的转录子(RNA分子),可以简便地加入样本中并转录成cDNA。它会提示仪器报错或者试剂出错、体系构建错误以及存在抑制剂。内置对照和真正的转录子表现相当,因此可用于确保正确的逆转录和扩增过程。双重监控因子包括内置对照和参考基因,与目的基因进行直接比较。

QuantiNova Probe RT-PCR Kit中的预混液含有蓝色惰性染料,不会干扰real-time PCR,但是使反应液在管中或孔板中便于观察。QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer含有黄色惰性染料。当稀释在QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer中的模板核酸被加入预混液时,溶液颜色由蓝色变为绿色,便于观察移液和反应体系构建是否正确。

QuantiNova DNA Polymerase与专有RT-PCR缓冲液配合使用,能够高灵敏度的定量检测低拷贝的RNA靶序列,在宽泛的范围内符合线性规律,任何PCR仪上实现准确定量检测。
Principle
QuantiNova Probe RT-PCR Kit含有优化的即用型预混液,可使用序列特异性探针对RNA靶序列进行高特异性和灵敏度的real-time定量分析。此试剂盒适用于各种类型的序列特异性探针,包括水解探针检测(如TaqMan和其他双标记探针)和Scorpions引物。

QuantiNova Probe RT-PCR Kit独特的PCR缓冲液含有浓度平衡的K+和NH4+,能促使特异性引物退火,获得高PCR特异性和灵敏度。此外,HotStaRT-Script逆转录酶可从不同量的RNA模板合成cDNA,而QuantiNova DNA Polymerase具有严格的热启动,可防止形成非特异性产物。独特的二阶段热启动程序使反应体系构建在室温下能保持稳定长达2小时。

为获得准确的real-time RT-PCR基因表达检测结果,cDNA的唯一扩增和检测置关重要。基因组DNA的干扰可通过gDNA去除步骤来避免,因此无需RNA样品纯化之后专门的DNA酶消化过程,从而节约了时间和成本。此外,您也无需设计RNA特异性的引物和探针。

内置可视染料方便您确认模板是否加入反应液,因此避免反应体系构建过程中的移液失误。

cDNA合成过程的变化检测能便于观察结果的重复性。新开发的内置对照是一个已知的转录子(RNA分子),可以很简便地加入样本中并转录成cDNA它会提示仪器报错或者试剂出错、体积构建错误以及存在抑制剂。
Procedure
QuantiNova Probe RT-PCR Kit无需繁琐、费时的优化反应条件。只需将引物、探针和RNA模板加入RT-PCR即用型预混液,按照试剂盒使用手册中的实验方案进行反应,就可用于各种real-time PCR仪,快速获得可靠结果。
Applications
QuantiNova Probe RT-PCR Kit可用在各种real-time PCR仪上对RNA目标序列进行基因表达分析,包括Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪,以及Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的仪器。
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